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LPS(エンドトキシン)の電気移動後の染色  トピック削除
No.9745-TOPIC - 2021/06/11 (金) 22:55:39 - M
ある細菌よりLPSを精製しました。
SDS-PAGEで、どのくらい精製できているか確認を行いたいと考えています。
論文などでは、SDS-PAGE後に、LPSを銀染色で確認しているものが多いです。
銀染色キットを持っていなかったので、ルミテイン染色を行ったのですが、全く検出できません。(BSAを一緒のゲルで泳動したものは検出されています)

よく考えたらLPSは、タンパク質ではない(糖脂質)ので、もしかしたら、アミノ酸を認識する染色では、LPSを染色できないのではないかと思いました。
他に研究室にあるのはCBB染色液だけなので、そうだとするとCBB染色でも、LPSは染まらないのでしょうか?

LPSを精製したのは初めてでして、他に詳しい人が近くにいないため、ご相談している次第です。
よろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.9745-5 - 2021/06/16 (水) 15:19:21 - M
おおさん

情報ありがとうございます。
申し訳ありません。自分で調べるようにいたします。
ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.9745-4 - 2021/06/15 (火) 07:10:47 - おお
>[Re:3] Mさんは書きました :
> おおさん>
>
> 情報ありがとうございます。やはり、CBBでは染まらないようですね。
>
> LPSには金属イオンが結合しやすいのでしょうか。質問ばかりで申し訳ありませんが、原理がどうなっているのかと思いました。ご教授いただけましたら幸いです。

それぐらいご自身で調べられませんか?

https://analyticalsciencejournals.onlinelibrary.wiley.com/doi/epdf/10.1002/elps.1150191407

(無題) 削除/引用
No.9745-3 - 2021/06/12 (土) 17:19:49 - M
おおさん>

情報ありがとうございます。やはり、CBBでは染まらないようですね。

LPSには金属イオンが結合しやすいのでしょうか。質問ばかりで申し訳ありませんが、原理がどうなっているのかと思いました。ご教授いただけましたら幸いです。

(無題) 削除/引用
No.9745-2 - 2021/06/12 (土) 09:13:54 - おお
https://www.longdom.org/open-access/lipopolysaccharide-lps-and-proteinlps-complexes-detection-and-characterization-by-gel-electrophoresis-mass-spectrometry-and-bioass-0974-8369-1000277.pdf

これを見る限りLPSはCBBでは染まってませんね。この論文ではLPSはmidazole-zincで検出しているようです。

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3466933/
この論文はPro-Q Emerald 300をつかってLPSを検出しているようです。Pro-Q Emerald 300でcarbohydrate を検出できるようです。

LPS(エンドトキシン)の電気移動後の染色  削除/引用
No.9745-1 - 2021/06/11 (金) 22:55:39 - M
ある細菌よりLPSを精製しました。
SDS-PAGEで、どのくらい精製できているか確認を行いたいと考えています。
論文などでは、SDS-PAGE後に、LPSを銀染色で確認しているものが多いです。
銀染色キットを持っていなかったので、ルミテイン染色を行ったのですが、全く検出できません。(BSAを一緒のゲルで泳動したものは検出されています)

よく考えたらLPSは、タンパク質ではない(糖脂質)ので、もしかしたら、アミノ酸を認識する染色では、LPSを染色できないのではないかと思いました。
他に研究室にあるのはCBB染色液だけなので、そうだとするとCBB染色でも、LPSは染まらないのでしょうか?

LPSを精製したのは初めてでして、他に詳しい人が近くにいないため、ご相談している次第です。
よろしくお願いいたします。

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