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(無題) 削除/引用 No.9728-9 - 2021/06/08 (火) 17:12:59 - 774 クラッシュドライアイスは間隙ができるので冷えにくいかもしれません。 下に500gか1kgの板状のドライアイスを置いて、その上に包埋容器を乗せる+アルミブロックで挟む方が多少はましになるかな。 液体窒素+イソペンタンの方が急速凍結できるけど、液体窒素が使えないならドライアイス+アセトン+イソペンタンにするとか。 ところで「巣が食う」じゃなくて「鬆が立つ/入る」ですね。

(無題) 削除/引用 No.9728-8 - 2021/06/08 (火) 08:52:08 - ぽー 参考にどうぞ。 凍結させるのに時間がかかるのもよくないので、 ドライアイスをできるだけ平に敷き詰めるのもポイントかもしれないです。 http://www.pmdrinsho.jp/MuscleBiopsyArtefact.html

(無題) 削除/引用 No.9728-7 - 2021/06/07 (月) 23:52:00 - IO ありがとうございます!! 私の研究室ではドライアイスを粉砕して凍結しています。 かなりの数を作製していたので凍結時に十分に凍結しきれなかったのではないかなと今ふと思いました。

(無題) 削除/引用 No.9728-6 - 2021/06/07 (月) 22:51:45 - FEN ＞ボコボコ小さい穴が空いている状態 私も経験があります。同じかな〜と思い質問させて頂きました。 OCTコンパウンドに脳を包埋して凍結する時はどうされてますでしょうか？ 私は、液体窒素もしくは-80度でできるだけ早く凍結するだけで解決しました。液体窒素で凍結するときは10分ほど付けておきました。もし-80度で凍結する時は30分くらい入れておけば十分に穴が無くなります。しかし、-20度で凍結すると薄切切片を作成した時点で穴が目立ってしまいます。 もし、頓珍漢な解答でしたら済みません。

(無題) 削除/引用 No.9728-5 - 2021/06/07 (月) 21:53:05 - IO わかりづらい表現で申し訳ありません🙏 マウス脳の皮質がボコボコ小さい穴が空いている状態といえば近いでしょうか。。。

(無題) 削除/引用 No.9728-4 - 2021/06/07 (月) 19:32:37 - FEN 「巣が食っているような状態」ってどんな状態を指すんでしょうか。 最初読んだとき、小さな穴が目立つのかなと思ったんですが、実際はどんな状態のことを言ってるんでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.9728-3 - 2021/06/07 (月) 07:19:00 - IO 4%PFAで後固定したのちに30%Sucroseに置換して沈むのを確認してから、モルドに入れ凍結しています。

(無題) 削除/引用 No.9728-2 - 2021/06/05 (土) 19:42:55 - あの 固定の後のステップはどうしてます？ 脳の場合には、薄めのスクロースで沈ませてから、 濃いめに換えていくことが必要ですけど。

マウス脳の灌流固定について 削除/引用 No.9728-1 - 2021/06/05 (土) 15:00:32 - IO マウス脳を灌流固定し、その後クライオスタットで薄切して免疫染色を行なっています。 最近、検鏡すると、脳皮質の部分に巣が食っているような状態になっており、免疫染色をしてもシグナルが拾えません。 このようなとき灌流固定時の生食と4%PFAのシリンジでの灌流圧が高すぎるのでしょうか、もしくはその他の原因があるのかお教え願いたいです。

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