Bio Technical フォーラム

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96wellプレートでのリポフェクションでのバラつきについて トピック削除
No.9697-TOPIC - 2021/05/22 (土) 01:22:15 - たけい
いつも勉強させて頂いております。
96wellプレートでのリポフェクションでのバラつきで悩んでいることがあるので、プロの方々のご意見を頂ければと幸いです。

りパーストランスフェクション法&リポフェクション法で導入したルシフェラーゼ遺伝子をルシフェリンで見ております。n=3で96wellプレート1-3列、4-6列、・・・9-12列が同じ条件になるように設定しています。この時6列目すべてで異様に高い発光値を示し、すなわち2条件目がn=2になってしまい困っています。何度かやりましたが、同じような結果となりそろそろ無視できなくなってきましたが、原因が特定できていません。

細胞はリザーバに広げて8連ピペットで入れていくのですが、毎回しつこいくらいに容器をゆするのとピペッティングでよく混ぜています。
撒いた後の培養は37度でふたをかぶせており、温度を均一にするためにインキュベーターの奥の方に置いたりアルミホイルで包んだりしましたが、ダメでした。

ご意見頂けますと幸いです。
よろしくお願い致します。
 
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(無題) 削除/引用
No.9697-2 - 2021/05/22 (土) 03:46:09 - k
決まった箇所、部域のwellでおかしな値が、ということならばおそらく測定装置(ルミノプレートリーダー)に起因する問題のような気がします。別の装置で試すか、メーカーに相談して検査(and 修理)してもらってください。

96wellプレートでのリポフェクションでのバラつきについて 削除/引用
No.9697-1 - 2021/05/22 (土) 01:22:15 - たけい
いつも勉強させて頂いております。
96wellプレートでのリポフェクションでのバラつきで悩んでいることがあるので、プロの方々のご意見を頂ければと幸いです。

りパーストランスフェクション法&リポフェクション法で導入したルシフェラーゼ遺伝子をルシフェリンで見ております。n=3で96wellプレート1-3列、4-6列、・・・9-12列が同じ条件になるように設定しています。この時6列目すべてで異様に高い発光値を示し、すなわち2条件目がn=2になってしまい困っています。何度かやりましたが、同じような結果となりそろそろ無視できなくなってきましたが、原因が特定できていません。

細胞はリザーバに広げて8連ピペットで入れていくのですが、毎回しつこいくらいに容器をゆするのとピペッティングでよく混ぜています。
撒いた後の培養は37度でふたをかぶせており、温度を均一にするためにインキュベーターの奥の方に置いたりアルミホイルで包んだりしましたが、ダメでした。

ご意見頂けますと幸いです。
よろしくお願い致します。

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