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(無題) 削除/引用 No.9687-2 - 2021/05/17 (月) 23:11:57 - おお 1. -20度の保存ではタンパク質の分解がSDSで変性させていたとしても進んでしまう。 -80度でも徐々にだめになる蛋白もありますが、-20度よりマシかと思います。 2. 保存温度は問題ではなく、4回も凍結融解すればタンパク質は壊れてしまう。 凍結融解自体で蛋白の構造が変になることはあっても、分解が進む直接の原因にはならないと思う。ただ融解することで一時的に温度が上がるので、そのため分解が進む可能性はあると思う。

サンプルバッファーで処理した組織ライセートの保存温度 削除/引用 No.9687-1 - 2021/05/17 (月) 22:22:11 - SDS マウスの肝臓や小腸を1％Triron X100を含むlysis bufferでlysisを行い、遠心し、その上清にSDSサンプルバッファーを加え、95度、3分の煮沸を行いました。その後の保存に関して質問させてください。 私は-20度で保存しています。凍結融解は4回ほど行ったかと思いますが、4回目で以前見えていたバンドが出なくなりました。 以前見えていたのでポジコンとして使用したかったのですが、この原因を後学のために知りたいです。 可能性として2点あり、 1. -20度の保存ではタンパク質の分解がSDSで変性させていたとしても進んでしまう。 2. 保存温度は問題ではなく、4回も凍結融解すればタンパク質は壊れてしまう。 を考えています。 もし1であれば今後-80度の保存をしていかなくてはいけません。ただ、-80度に保存する場所を工面しなければなりません。 2であれば分注することで複数回の凍結融解は回避でき、今度も-20度での保存を行おうと思っています。 -20度のフリーザーは開け閉めが多く、想像以上に凍結融解が繰り返されているのかもしれませんが... ご教示いただけますと幸甚です。

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