BioTechnicalフォーラム [SUY2H 酵母の選択培地における生育不良]

SUY2H 酵母の選択培地における生育不良

No.9671-TOPIC - 2021/05/11 (火) 20:49:02 - rrr

原因や改善策を教えていただきたいです。

Mo Bi Tec社のSplit Ubiquitin Y2Hシステムのキットを使用して
シロイヌナズナ膜タンパク間の相互作用を調べています。

レポーター株とPlayライブラリの接合株をSD-LW液体培地(最小培地)で
振盪培養してもODが0.4程度までしか上がりません。
寒天培地では通常通り生育します。

エアレーションや培地の組成には問題はないと思われます。

液体培地での前培養でODを3～4程度まで上げるにはどうすればよいのかご教示いただきたいです。よろしくお願いします。
　

- このトピックにメッセージを投稿する -

全6件 ( 1 ～ 6 )　前 | 次　1/ 1. /1

おお様

削除/引用

No.9671-6 - 2021/05/24 (月) 14:54:10 - rrr

ご返信ありがとうございます。
試験管で培養しているので溶液量はプロトコルと違い2～5ｍLで行っています。
また担当教員の指示通り、一度24～36時間ほど培養してから菌液を100µLまたは200µL接種しています。
培地についてですが、うまくいったものと同じ培地を使用しても次回はうまくいかないこともありました。
洗浄や培地づくりにも一層気を使ってみます。
またほかの方法で相互作用を確認できないか調べてみます。
ありがとうございました。

(無題)

削除/引用

No.9671-5 - 2021/05/18 (火) 00:46:14 - おお

https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=&cad=rja&uact=8&ved=2ahUKEwiqpOOtgtHwAhUXHc0KHT-hC3oQFjADegQIBRAD&url=https%3A%2F%2Fwww.researchgate.net%2Fprofile%2FGuetouache_Mourad%2Fpost%2FHow_to_make_a_cDNA_library_for_protein_protein_interaction_Y2H%2Fattachment%2F59d637d279197b80779951c1%2FAS%253A394650025250830%25401471103306882%2Fdownload%2FMGP-Y2H%2BMembrane%2BProtein%2BKit.pdf&usg=AOvVaw3-V0DxUpqnrVgmjSgD3UTo

マニュアルがこちらで見れたのですが、OD ３とかまで増やすような記述はないですね。
わたしはそこに書かれた株は使ってないのでなんとも言えませんけど。

たまにキュベットの溶液の入る幅が、Photometerのスリットの幅より小さくって、溶液の入ってないガラスの部分を光が通過するため低く見積もられることがありますけどね。

レポーター株が導入してない株やからベクター導入株より増えにくいなら、その遺伝子が悪さしている可能性があります。
何も入っていない株でも、同様にグロースが遅いなら培地などが原因の可能性が高いです。
もちろん適切なアミノ酸を加えた状態でですが。

培地の作り方はそんなに難しいものでもないですが、使った容器が洗浄後うまく洗剤が落とせてないものを使ったりすると増殖が抑制されることがあります。

なかなか完全に把握できないので適切なアドバイスは難しいですが。

(無題)

削除/引用

No.9671-4 - 2021/05/17 (月) 14:31:24 - rrr

返信が遅れ申し訳ありません。
見た目的にもODは上がっていないように見えます。沈殿もしていません。
コントロール株の生育も同様に悪いです。

(無題)

削除/引用

No.9671-3 - 2021/05/12 (水) 06:09:21 - おお

レポーター株の生育状況はどんな感じですか？

(無題)

削除/引用

No.9671-2 - 2021/05/12 (水) 06:07:52 - おお

見た目的にはどうですか？