BioTechnicalフォーラム [凍結切片の厚さ]

凍結切片の厚さ

No.9656-TOPIC - 2021/05/04 (火) 00:01:07 - cryosection

ご意見いただけますと助かります。

マウス精巣組織の凍結切片の免疫染色をしています。
ただ20 umではなく、もう少し厚目で染色したいです。
30 umを試そうと思いますが、50 umも試そうと思っています。

ただ厚くなるほど切片は剥がれやすいと知りました。
ただ50 umがそれを招くほどの厚さなのかどうかはわかりません。

剥がれやすくなる厚さやその防止方法についてご教示いただけませんでしょうか？
よろしくお願いいたします。
　

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No.9656-9 - 2021/05/06 (木) 20:05:20 - んjp

私たちは凍結切片の場合は、たとえ共焦点レーザー顕微鏡で観察としても、厚さ8μm前後で切片を作成しています。なので30～50μmはなんか随分厚いなあとか思います。

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No.9656-8 - 2021/05/05 (水) 00:21:16 - cryosection

AA様、ぶん様
大変示唆に富むコメントをいただき、ありがとうございました。

一晩で25 umという目安があるとは知りませんでした。
温度にも違いが生じますでしょうか？例えば4度オーバーナイトであれば25 umだけど、室温オーバーナイトならもっと浸潤するというような...
私は室温でオーバーナイト染色しています。

疎水性、親水性で染まり方が異なることもあるのですね...
一度松波さんのリンクから調べてみます。
ありがとうございました。

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No.9656-7 - 2021/05/04 (火) 11:57:33 - ぶん

精巣は染色した経験が無いけど、
コーティング剤が違うスライドグラスを
使い分けてみることは必要でしょうね。

疎水性タイプとか、親水性タイプとか、色々。

既報を調べてみて、もし良い論文が無ければ、
松浪ガラスさんが、老舗で、色々教えてくれるので
電話してみたら。

(無題)

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No.9656-6 - 2021/05/04 (火) 11:47:10 - AA

学生の頃、
脳の切片への抗体の浸潤は一晩で25umくらいだから貼り付けるは25um、フローティングは50um
というふうに教わりました。
根拠は示されなかったので経験則かもしれませんが、実際100umオーバーで通常条件で染色すると、透明化して観察してみると染まらない部分が出てくるのであながち全くの間違いということはなさそうに思います

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No.9656-5 - 2021/05/04 (火) 10:41:28 - cryosection

ぶん様

なるほど...やはり抗体の浸潤が悪くなるのですね...
20 umや30 umで問題なく、50 umで問題になるならそこが限界なのですね...
ありがとうございました。

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No.9656-4 - 2021/05/04 (火) 10:30:54 - ぶん

抗体などを両サイドから染み込ませるために必須だと理解してます。

スライドグラスに接着させると、上だけの片面からしか染み込みがない。

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No.9656-3 - 2021/05/04 (火) 03:07:46 - cryosection

ぶん様
ありがとうございます。
脳の50 umというのはフローティング方法でのみ行っておられますか？
スライドグラスに貼り付けたままで染色はやはり難しいでしょうか？