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タグ付ベクター導入細胞でのアッセイについて トピック削除
No.9640-TOPIC - 2021/04/26 (月) 13:29:39 - ぱん
細胞株にある遺伝子を過剰発現させて、細胞増殖、細胞周期、アポトーシスなどを確認したいと思っています。
Mycタグ付の過剰発現ベクターがあるのですが、このベクターで過剰発現して上記のアッセイをしても問題ないのでしょうか。それともMycタグによる影響がでるのでしょうか。
 
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(無題) 削除/引用
No.9640-3 - 2021/04/27 (火) 01:47:59 - おお
タグをつける事によって機能が阻害されるケースはあります。問題ないかどうかはそれぞれのタンパクで違うわけで、検証するなど何らかの裏付けが必要かもしれません。

(無題) 削除/引用
No.9640-2 - 2021/04/26 (月) 15:36:43 - qq
一般論で答えてよいのだと思いますが、
1)Myc-tag単独で何らかの作用がありはしないか?
Myc-tag付きのコントロールたんぱくか、機能をつぶしたタンパクを発現させて変化がなければ、いいんじゃない?空ベクターで影響ないから、mycタグ自身に問題がないとは言えないような気もします。

2)Myc-tag付きのタンパク質の生理作用が変わる可能性はないか?
Myc-tagのついていないタンパク質を発現させても同じ作用が確認できればいいんじゃない?でも、タグなしの発現チェックなどが面倒な感じなので、最初は避けるような気がする。myc-tagは、SEEDLなので、C末やN末の負電荷が決定的な場合は、注意するべきでしょうね。

タグ付ベクター導入細胞でのアッセイについて 削除/引用
No.9640-1 - 2021/04/26 (月) 13:29:39 - ぱん
細胞株にある遺伝子を過剰発現させて、細胞増殖、細胞周期、アポトーシスなどを確認したいと思っています。
Mycタグ付の過剰発現ベクターがあるのですが、このベクターで過剰発現して上記のアッセイをしても問題ないのでしょうか。それともMycタグによる影響がでるのでしょうか。

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