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(無題) 削除/引用 No.9618-9 - 2021/04/15 (木) 13:53:59 - JINTAI ありがとうございます。この方法は良さげですね。プローブの長さを調節するのも簡単そうですし。まずはFwdだけ蛍光修飾してみて、蛍光が弱いなどの問題がありそうだったらRevの修飾してみます。

(無題) 削除/引用 No.9618-8 - 2021/04/15 (木) 11:35:48 - G25 普通に、PCR用、サイクルシークエンス用などにも供される蛍光団末端標識ですので、熱安定性は心配しなくてもいいと思います。

(無題) 削除/引用 No.9618-7 - 2021/04/15 (木) 11:13:21 - s 自分のbiotinラベルドプローブは30merぐらいだったのですが、ある程度長いならPCRで全然いいと思います。 熱安定性が心配なら、熱処理の有無で適当なメンブレンかラップにスポットしてImagerで見ればいいだけでは。

(無題) 削除/引用 No.9618-6 - 2021/04/15 (木) 10:51:02 - G25 5'蛍光団標識したプライマーでPCRをかけた産物をプローブにするんじゃだめ？ たぶんそのほうが安く上がるし、アニールで二重鎖を得るより確実（一本鎖同士のアニールではどうしても100% duplexにはならない）

(無題) 削除/引用 No.9618-5 - 2021/04/15 (木) 09:46:09 - JINTAI 追加で質問ですが、オリゴをアニーリングする際には温度を70-80℃に上げるかと思いますが、蛍光標識がその温度に耐えうるかどうか、確認する方法はありますか？今回はご提案いただいたcy5.5で行こうと思っています。

(無題) 削除/引用 No.9618-4 - 2021/04/14 (水) 18:50:31 - JINTAI なるほど、そういった方法があるのですね。 この場合、cy5.5標識するのは片方の断片だけでもいいでしょうか。 両方とも標識しないと蛍光が弱いとか、そういったことはあり得ますか？？

(無題) 削除/引用 No.9618-3 - 2021/04/14 (水) 17:15:42 - s biotinを用いた化学発光の系で自分でラベルするのと合成してもらうのを両方試したことがありますが、合成してもらうほうがシグナル強度も安定し、ずっと良かったです。

(無題) 削除/引用 No.9618-2 - 2021/04/14 (水) 13:51:12 - T-2 DNA受託合成の会社に、末端をCy5.5などで修飾した目的の配列の センス鎖とアンチセンス鎖を合成してもらい、 自分でアニーリングして用いればよいのではないでしょうか。 最近はどこでも100baseぐらいの合成はしてくれますし、 末端修飾も様々なものが用意されています。

蛍光DNAプローブを作成するためのキット 削除/引用 No.9618-1 - 2021/04/14 (水) 13:31:58 - JINTAI いつも勉強させてもらっています。 現在DNAとタンパク質の相互作用を検出するためゲルシフトアッセイの系を構築中です。 LI-CORのOdyssey CLxを使って蛍光標識したDNAプローブとタンパク質の相互関係を調べたいと思っています。 もともとodysseyが蛍光ex /em 685/700です。LI-CORからIRDye 700で標識された特定の配列なども販売されているのですが、今回はそれ以外のDNA配列を使用したいと思っております。 em 700nm前後でDNAの5' or 3' endを蛍光標識できるキットをどなたかご存じないでしょうか？

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