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接着型PC12について トピック削除
No.9604-TOPIC - 2021/04/06 (火) 10:54:52 - nunu
ATCCより購入した接着型PC12(CRL-1721.1)を培養していましたが、あるときすべての細胞が剥離し浮遊してしまいました。
培養条件は、
培地:Ham's F-12K, 2%P/S, 5%HS, 2%FBS
容器:100mmディッシュ(PLLコート)
播種密度はその時々によってまちまちでした。コンフルになってから2日ほど放置したこともあります。
パッセージは購入時がunknownでしたので正確にはわかりませんが、+16世代目で上のような状態になっていました。

もともとPC12は浮遊細胞とのことなので、培養中に性質が浮遊型に変わってしまった...なんてことがあるのでしょうか。
培地組成はATCC推奨よりも血清が3割ほどの濃度でしたので、そのせいもあるのでしょうか。
当方細胞手技は不慣れで(組織内で初めて培養を開始しています)、何か関連情報をご存知の方にご教授いただければ幸いです。よろしくお願い致します。
 
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(無題) 削除/引用
No.9604-3 - 2021/04/07 (水) 09:15:53 - PD
細胞培養し始めてすぐの学生の時にPC12を扱ったことがあります。同じように、ある時急に剥がれて(死んだ?)しまったことがありましたが、培地交換で半分Conditioned mediumを使用するようにしたところ、剥離しなくなりました。調子が悪かったのかも?

(無題) 削除/引用
No.9604-2 - 2021/04/06 (火) 21:14:47 - おお
浮遊型であってもコートを施したディッシュにはくっつくと思いますので、相当変なことが起こっているのではないかと思いますが、、、

https://reader.elsevier.com/reader/sd/pii/S0091679X03010124?token=49CC1763258A92CEB0B853E644270A45601570F681F7ADC1AAF0847C5A42227E9D7725E0DFE5EC968F8AE89448204A02&originRegion=us-east-1&originCreation=20210406114620

こちらでは、マイルドな条件で細胞を剥がした後、ピペッティングで細胞塊をほぐして、Single cellの状態にしてから継代するようにしたほうがいいと書いてます。細胞塊のまま まくと性質が変わってしまうようです。

ATCCではCellBINDというコートしていないけど、表面処理を工夫していより接着性を強くしたDishを推奨しているようです(何社か同等品を出しています)。Poly Lysineなどで継代しているような記述は2、3文献を見ましたが、見当たりませんね、、、

接着型PC12について 削除/引用
No.9604-1 - 2021/04/06 (火) 10:54:52 - nunu
ATCCより購入した接着型PC12(CRL-1721.1)を培養していましたが、あるときすべての細胞が剥離し浮遊してしまいました。
培養条件は、
培地:Ham's F-12K, 2%P/S, 5%HS, 2%FBS
容器:100mmディッシュ(PLLコート)
播種密度はその時々によってまちまちでした。コンフルになってから2日ほど放置したこともあります。
パッセージは購入時がunknownでしたので正確にはわかりませんが、+16世代目で上のような状態になっていました。

もともとPC12は浮遊細胞とのことなので、培養中に性質が浮遊型に変わってしまった...なんてことがあるのでしょうか。
培地組成はATCC推奨よりも血清が3割ほどの濃度でしたので、そのせいもあるのでしょうか。
当方細胞手技は不慣れで(組織内で初めて培養を開始しています)、何か関連情報をご存知の方にご教授いただければ幸いです。よろしくお願い致します。

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