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(無題) 削除/引用 No.9528-5 - 2021/02/21 (日) 11:37:27 - s 教科書的な知識では、ATRの下流はChk1、Cdc25、G2 arrestだと思うのだけど。 検索したらこんなのありました。 https://www.jbc.org/article/S0021-9258(19)75111-4/fulltext G2 arrestって一週間も続くだろうか。

(無題) 削除/引用 No.9528-4 - 2021/02/21 (日) 11:28:31 - KOマウス PEGを使わない場合でも起こることなのでPEGの影響ではないと考えます。MOIが高すぎるのはありえるのかもしれません。このようなストレス応答は確かに細胞により大きく異なるようで、今の所ヒト正常繊維芽細胞で突出して顕著という感じで、U2OSのようなp53 wt細胞ではがん細胞同様ほぼ起こらず、マウスの細胞でもあまりないです。

(無題) 削除/引用 No.9528-3 - 2021/02/21 (日) 10:57:57 - おお PEGの混入による影響は疑う余地がないですか？

(無題) 削除/引用 No.9528-2 - 2021/02/21 (日) 10:55:26 - ii Fibroblastは試したことが有りませんが、20 MOIとか極端な量でなければprimary細胞にレンチを入れてそんなに増殖に影響があった印象が有りません。 どれくらいのMOIを想定されているのでしょう？

Lenti/Retroviral transductionに伴う正常細胞の増殖停止 削除/引用 No.9528-1 - 2021/02/21 (日) 10:30:29 - KOマウス レンチ/レトロウィルスをがん細胞に感染させる場合は問題なく感染細胞が速やかに増殖を続けてくれるのですが、マウスやヒトのfibroblastでは形質転換に必要なレベルのウィルス（を含む培養上清もしくはPEGでペレット化したウィルスをPBSに再懸濁したもの）を細胞に与えると、（ポリブレン添加の有無などに関わらず）どうしても大部分の細胞の増殖が（一週間程度）停止してしまいます。そこから一部の感染細胞が増殖を再開してくれはするのですが、より速やかに、大部分の感染細胞で増殖を起こさせてやる方法などをご存知の方はおられますでしょうか？調べた所、ウイルス感染に際してはレシピエントのATRパスウェイが活性化し、そのことがウイルスの導入に重要であるらしく、カフェインでATRをブロックすると形質転換体の割合が低下するとの事でした。その下流のp53パスウェイだけを一時的に抑制してやるということも考えられますが、ゲノムに異常が生じた細胞が増えてきてしまう恐れもあります。何か良い方法はありますでしょうか？

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