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(無題) 削除/引用 No.9526-9 - 2021/02/20 (土) 10:49:14 - 実験始めました。 ありがとうございました。自分の理解不足でした。

(無題) 削除/引用 No.9526-7 - 2021/02/20 (土) 10:11:21 - MCF >[Re:5] 実験始めました。さんは書きました : > その方法だと固定した細胞でも測定できるのでしょうか。 なぜ出来ると思うのかわからない

(無題) 削除/引用 No.9526-6 - 2021/02/20 (土) 09:47:31 - ど素人 以下の URL など参考になりそうな気がしました。 https://www.rndsystems.com/resources/protocols/analysis-cell-viability-using-7-amino-actinomycin-d-7-aad Procedure Harvest cells and aliquot up to 1 x 106 cells/100 μL into FACS tubes. Wash the cells by adding 2 mL PBS (or HBSS), centrifuging at 300 x g for 5 minutes and then decanting the buffer from pelleted cells. Repeat wash step for a total of 2 times. Note: Staining of cell surface antigens with antibodies may be done at this point. 7-AAD cannot be used when labeling intracellular molecules. Resuspend cells in 100 μL of Flow Cytometry Staining Buffer (Catalog # FC001). To adjust flow cytometer settings for 7-AAD, add 5 - 10 μL of 7-AAD staining solution to a control tube of unstained cells. Mix gently and incubate for 30 minutes at 4 °C in the dark. Determine 7-AAD fluorescence (using the FL-2 or FL-3 channel) with a FACScan™ instrument. Note: Use the FL-2 channel if staining only with 7-AAD. Collect 7-AAD fluorescence in the FL-3 channel if the cells have also been stained with an FITC- and/or PE-conjugated antibody. Acquire data for unstained cells and single-color positive controls. Add 5 - 10 μL of 7-AAD staining solution to each sample and incubate for 30 minutes at 4 °C in the dark prior to analysis. Set the stop count on the viable cells from a dot-plot of forward scatter versus 7-AAD. Note: Do not wash cells after the addition of the 7-AAD staining solution. FACS and FACScan are trademarks of Becton Dickinson and Company.

(無題) 削除/引用 No.9526-5 - 2021/02/20 (土) 09:31:54 - 実験始めました。 そんな方法があったのですね。真似させてもらいます。もう一点だけ教えてほしいのですが、その方法だと固定した細胞でも測定できるのでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.9526-4 - 2021/02/20 (土) 03:25:32 - FCM 私は横着なことをしていまして、抗体で染色し、それを洗浄後、再懸濁させ、FACSチューブへサンプルを移す。 その後、フローサイトの機器の元へサンプルとPI (7AADでも可)を持って行き、機器が準備できたら、一つ目のチューブにのみ7AADを最適な濃度で加え、軽くボルテックス。 その後1分程度待ってからサンプルを解析しています。 つまり7AAD後に洗っていません。 気を付けることは、一つ一つのサンプルチューブを同じ出来るだけ時間7AADで染めるよう心がけており、間違っても全チューブに一度に7AADを入れたりはしていません。

(無題) 削除/引用 No.9526-3 - 2021/02/20 (土) 01:30:34 - 実験始めました。 ありがとうございます。では添加タイミングは最後　測定前ということになりますか？

(無題) 削除/引用 No.9526-2 - 2021/02/20 (土) 00:52:52 - FCM 7AADは一定時間染めた後にすぐに洗い流した方がいいと思います。 生細胞であっても長く染めると染まってきます。

7AAD の使い方 削除/引用 No.9526-1 - 2021/02/19 (金) 23:29:03 - 実験始めました。 フローサイトで死細胞を染色する3AADの使い方なんですが、他の抗体を添加する時と一緒に添加したらいいのでしょうか？プロトコールをみてもよくわからず、どなたか教えて下さい。

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