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タグについて 削除/引用 No.9504-7 - 2021/02/16 (火) 09:55:21 - MS アドバイスありがとうございます。V5タグをつけるベクターなので、ミリポアの抗体でうまくいかなかったら検討します。

(無題) 削除/引用 No.9504-6 - 2021/02/15 (月) 22:05:32 - おお >[Re:4] MSさんは書きました : > > ベクター導入したKRASが検出できればよいので、おすすめ頂いたミリポアのpan-RAS抗体を試してみようかと思います。 > すでに進行している状態なので得策かどうかわからないですが導入するK RasにTagをつけることは考えてもと思ったりもします。

カウンター染色 削除/引用 No.9504-5 - 2021/02/15 (月) 18:59:16 - MS すみません。初心者のためカウンター染色の意味を理解していないかもしれませんが、DAPIも染めていてそちらは問題なく染まっていました。

コメントありがとうございます。 削除/引用 No.9504-4 - 2021/02/15 (月) 18:56:25 - MS コメントありがとうございます。詳細の記載がなく失礼しました。 まず、不死化正常細胞にウイルスベクターにて変異KRASを導入し、サンタクルーズのK-Ras抗体(F234): sc-30を用いたウエスタンで過剰発現を確認しました。続いて、その抗体を使用して４％パラホルムアルデヒド/PBS（PFA)固定にて蛍光免疫染色を行いましたが、細胞質、核が一様に染まり、過剰発現細胞におけるシグナル増強も全くありませんでした。そこで、既報で使用されていたProteintech社のKRAS 抗体60 ウサギポリクローナル| カタログ番号: 12063-1-APを使用しましたが同様の結果でした。 ベクター導入したKRASが検出できればよいので、おすすめ頂いたミリポアのpan-RAS抗体を試してみようかと思います。 アドバイスありがとうございました。 引き続きよろしくお願いいたします。

(無題) 削除/引用 No.9504-3 - 2021/02/15 (月) 05:20:54 - medpf 昔、RASのIFをやってましたが、KRAS特異的とされている抗体はワークしなかったので諦めました。比較的最近の論文（PMID: 28951536）を見ても、この問題は解決されていない（ウエスタンでワークしても、IFではダメ）なようなので、他の方法でアプローチした方が無難かもしれません。。ミリポアのpan-RAS抗体なら行けると思いますが、KRAS特異的でないとダメですか？

(無題) 削除/引用 No.9504-2 - 2021/02/13 (土) 17:18:16 - おお どのようにうまく行かなかったのですか？ 使った抗体はどこの抗体ですか（カタログ＃など）？もし使える抗体ならコツとか見え方とか色々コメントが付くかもしれませんよ。 それと固定の方法も書いてませんよね。PFA固定のような気がしますが、他の方法もありますし。 カウンターでなにか染めましたか？

KRASの細胞免疫蛍光染色（IF)に使用可能な抗体 削除/引用 No.9504-1 - 2021/02/13 (土) 16:08:13 - MS 皆様 KRASの細胞免疫蛍光染色（IF)に使用可能な抗体を教えていただけませんか？KRASをを過剰発現した細胞（ウエスタンブロット確認済み）をポジティブコントロールとして、２社の製品を試しましたが、うまくいきません。宜しくお願い致します。

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