蛍光免疫染色の画像で、とあるタンパクの核に分布する分の蛍光の定量をしたいと思っています。別途ELISAなど別の手法でも定量を行って結果を補強する予定ですが、まずは画像上の蛍光定量を行いたいと思っており、今回はImage Jを用いた画像処理方法についてご質問させていただきたいと思います。
画像ですが、DAPIで核を、AF555で目的タンパクを染色して取得しています。
各条件のスライドは同時に準備し、同じ日に画像取得を行っています。
ある処理をその細胞に行うと核内で目的タンパクが増えることを示したいと思っており、実際に画像を見た印象では想定通り核内でそのタンパクが増えています。
元々細胞質にも分布しているタンパクであるため、今回はDAPIの画像を用いて核に相当するエリアを選択したのち、そのエリアだけでのIntegrated densityを求めたいと思っています。
1枚だけでやる場合のやり方は知っていて、数枚だけの時は手作業でやっていたのですが、今回の問題点としては200枚の写真があるため、なんとかStack imageを用いて一括して作業をしたいと思っています。
また、画像全体でのIntegrated densityをStack imageを用いて一括して行う方法は知っておりますが、今回、選択エリアを各画像に一括して当てはめるというやり方が分からず、困っています。
多分結構基本的なことなのだと思いますが、どなたかお知恵をお貸しいただきたく、どうかよろしくお願いいたします。 |
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