BioTechnicalフォーラム [ficollなしでbuffy coatを取る]

ficollなしでbuffy coatを取る

No.9467-TOPIC - 2021/02/02 (火) 07:18:50 - buffy

臨床で患者様から血液を採取した後、buffy coatを取って小さいチューブに小分けして凍結保存します。プロトコールを読むと、EDTAラベンダーチューブに採血をしてこのチューブを遠心し、血漿サンプルを少し除いた後に、
Very carefully, without getting into the erythrocyte layer below, pipette the buffy coat and transfer buffy coat to labeled cryovial.
とあるのですが、このようにFicollバッファーや専用のチューブを用いずにbuffy coatを採取したご経験がある方はいらっしゃいますか？正直いくら気をつけてもこの方法で赤血球を吸わないでbuffy coatを取るのは不可能のような気がするのですが。
　

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No.9467-5 - 2021/02/03 (水) 17:31:52 - Ficoll

Ficollを購入してもらえなかった時、必要に迫られて経験がございますが、非常に難しいと思います。赤血球の混入を避けることは出来ません。
また、採血後にFicollで遠心するという方法もありますが、採血管で「単核球分離用」という製品もございます。今回の実験用途に耐えうるならば、非常に簡便かと思います。私の場合はFicollで分離しても専用採血管で採血しても、結果に影響がない実験でした。
余談ですが、臨床検体ということなので付け加えますと、白血病で白血球数の桁が違うぐらいの患者様の採血ならば、目で見えるほど白血球の層が確認できた経験もあります。

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No.9467-4 - 2021/02/02 (火) 23:25:43 - buffy

コメントありがとうございます。
ですよね。普通にプロトコールに載っていたので、もしかしたらできるものなのか？と一瞬迷いましたが無理ですよね。上に意見してみようと思います。ありがとうございました。

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No.9467-3 - 2021/02/02 (火) 17:12:23 - ど素人

誰が書かれたプロトコールか分かりませんが、一般論としては無理ゲーではないでしょうか。しかし、50 mL 採血してものすごく細長いチューブに入れて遠心するなら、細胞をロスする前提にていけるかもしれません。単核球をロスしてはいけないならかなり難しいかと思います。

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No.9467-2 - 2021/02/02 (火) 14:12:02 - 774

Ficollを使用しても沈みきらなかった分が多少は混入しますし(用途によっては影響ない程度とはいえ)、仕方ないは仕方ないでしょう。
赤血球溶解液等は使わないのでしょうか?

凄く熟達した人が"very" carefullyにやらなければ成立しないんじゃ日常的なサンプリングは難しいですよね。