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(無題) 削除/引用 No.9414-2 - 2021/01/06 (水) 03:11:44 - おお 分化したC2C12はもともと剥がれやすいです。その上にTFの試薬を加えるのですから勝手な想像ですがなおさらなような気がします。Tetなどの誘導性のプラスミド等導入した系を使ったほうがいいのかなとおもいます。あるいはもしかしたらTFの試薬を変えるとベターなものがあるかもしれませんが経験がないので、どなたか経験のある方がいればコメントもらえるといいですね。 TFのためにPBSで洗う必要がありますか？

C2C12細胞で形成した筋管がMedium交換時に剥がれてしまう 削除/引用 No.9414-1 - 2021/01/06 (水) 01:45:40 - 筋管 C2C12細胞を分化誘導培地（2% Horse Serum in DMEM)で5日間分化させて、 筋管を形成しています。筋管は問題なく形成されるのですが、 5日目にsiRNAを行うためにMediumを交換すると高頻度で筋管が剥がれてしまいます。筋管形成するまでは、1日おきにMediumを追加しているので、 筋管形成がしっかりと完了するまでは問題無い状態です。 温めたPBSで洗浄し、温めたMediumをゆっくりと注入しているのですが、 高頻度で筋管が剥がれてしまします。12 well dishを用いていますが、 Collagen　Coatしても同様に剥がれてしまいます。 同じ操作をしているはずなのに、Wellによっては、剥がれない物もあり、 原因がはっきりしないので困っています。 同様な経験のある方で原因と対応方法がご存知でしたら、 ご教授いただければ幸いです。宜しくお願い致します。

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