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(無題) 削除/引用 No.9377-6 - 2020/12/17 (木) 10:04:15 - たろー うーん、確かにアンプリコンがかなり小さいのでノンスぺと区別がつかず二度手間になるような気もしてきました。他の方もおっしゃる様に普通にプライマー設計してPCRしたほうが結局早いかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.9377-5 - 2020/12/17 (木) 09:29:36 - G25 もちろんTaqMan反応産物を泳動して増幅産物を見ることもクローニングすることもできます。TaqMan系だとアンプリコンがかなり短いと思うので（100 bp以下とか）、短フラグメント分析用のアガロースで濃度の高いゲルと使うといいかと思います。 市販のTaqManプローブ、プライマーは配列非公開であるのが普通だと思いますが、どうしてもそのプライマーを使わなければならない事情があるんでしょうかね。標的遺伝子の全配列が未知ということもないと思うので自前でプライマーを設計するという手もあったかと思うのですが。

(無題) 削除/引用 No.9377-4 - 2020/12/17 (木) 06:51:17 - Taqman おお様　たろー様 書き込み、ありがとうございます。 原理的には可能とのことで安心しました。 まずは行ってみます。

(無題) 削除/引用 No.9377-3 - 2020/12/17 (木) 05:20:27 - たろー とりあえずやってみていいのではないでしょうか。probeありより多少特異性は落ちるのかもしれませんがダメならprimerを再設計すればよいだけですし。

(無題) 削除/引用 No.9377-2 - 2020/12/17 (木) 05:15:01 - おお 原理的には目的にアンプリコンは増えます。やれないことはないでしょう。 プライマーをデザインして買えばいいだけのことだったのではと思ってしまいますが。

Taqman Primer/Probeで普通のPCR 削除/引用 No.9377-1 - 2020/12/17 (木) 04:48:18 - Taqman 初歩的な内容なのですが教えていただきたく質問を投稿させていただきます。 ある遺伝子に関してPCRにてその存在を明らかにしたいです。 論文から、その遺伝子の確認はTaqman PCRでのみ行われています。 そこでそのTaqman primerとTaqman probeを入手し、RT-PCRをしてみたいのですが、研究室にはSybr Green用のマスターミックスしか使用経験がなく、Taqman用のマスターミックスはありません。 諸事情によりTaqman用のマスターミックスが使用できないため、通常のTaq polymeraseでPCRを行い、アガロースゲル泳動してバンドを見ればいいのではないかと考えています。 今回の目的には定量制は必要なく、そのDNAが存在しているかどうかを示せれば十分です。 私が今回購入したTaqman primerとTaqman probeはすでにミックスされております。 ただTaqmanの原理を学び、通常のTaq polymeraseが手元にあることから、定性的なPCRは可能では無いかと考えておりますが、それは正しいでしょうか？ ご意見をいただけますと幸甚です。よろしくお願いします。

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