Bio Technical フォーラム

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qPCRについて トピック削除
No.9359-TOPIC - 2020/12/07 (月) 16:09:54 - ef
こんにちは

現在、Agilent社のqPCR装置のAriaMxを使用して細胞壁に関する酵素の遺伝子発現を行っています。
その際に加える試薬は2×のSYBR Green, cDNA, 10MのFwとRvプライマー、滅菌水なのですが、どれだけ加えるべきなのか分かる方がいらっしゃいましたら教えていただきたいです。

また、この装置で測定した結果を解析の際に相対定量を棒グラフに示したいのですが、どのようにソフトウェアのボタンを押せば良いのでしょうか。

研究室の先輩にqPCRを用いていた方がいないため、基本的な事が分かりません。よろしくお願いいたします。
　
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No.9359-6 - 2020/12/08 (火) 19:01:06 - AA
>>2×のSYBR Green, cDNA, 10MのFwとRvプライマー、滅菌水なのですが、どれだけ加えるべきなのか

反応液の組成すらわからないならまずは一連の流れを把握するところから始めるべきです。
アジレントのサポートでもいいですし、研究室に他にやってる人がいないなら共通機器でしょうから、それの管理者や最悪他のユーザーにお願いしてでも作業を見せてもらうことをおすすめします。
特にソフトの使い方なんかはメーカーや使っている人に聞かないとわかりません。
誤った操作で機械を壊したりしたら大変です。

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No.9359-5 - 2020/12/08 (火) 05:15:41 - おお
Ct値がでると相対量も計算できると思うのだが、、、

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No.9359-4 - 2020/12/07 (月) 23:29:03 - cvgh
普通はqPCR試薬の説明書に書いてあると思うのですが。なければメーカーに言って送ってもらえばいいです。
こういうのはメーカーに聞くのが確実だし、一番早く解決します。主要なメーカーならば、相談すれば技術的なことをサポートできる人が訪問してくれることも可能な場合が多いです。ラボの伝承的なプロトコルもいい面もあるのですが、誤解や間違った方法や遠回りの方法が代々踏襲されていることもしばしばあるので、やはり自分の研究ですから自分自身で原典に当たってみるとか、その方面のプロの専門家に聞くことは大切です。

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No.9359-3 - 2020/12/07 (月) 18:57:01 - noname
Agilentは親切に日本語版の簡易マニュアルを出してくれていますね。
Mixの作り方とか機械の操作方法も書いてありました。
ttps://www.chem-agilent.com/contents.php?id=1003303

後はqPCRの教科書など大学生協にも売っていると思いますので
それを見て基本的なことを理解したほうがよろしいと思いますよ。

(無題) 削除/引用
No.9359-2 - 2020/12/07 (月) 17:59:37 - G25
先輩が居ようが居まいが、まず自分で試薬、装置の添付マニュアルを読みましょう。ちゃんと読んだ上で経験者のインストラクションやアドバイスをうけるならともかく、ゼロから人伝て頼みというのはありえない。
その先輩が正しく理解しているとも限らないしね（先輩ってやつは後輩に対してええカッコしようとして、往々にしてよく理解していないことでも、間違ったこと、いい加減なことを教えるもの）。


マニュアルは正規に購入しているならあるはずです。何らかの理由で手元になくても、今は大抵の製品マニュアルはwebで公開されていますし、公開されていなくてもメーカーに頼めば送ってくれるはず。

qPCRについて 削除/引用
No.9359-1 - 2020/12/07 (月) 16:09:54 - ef
こんにちは

現在、Agilent社のqPCR装置のAriaMxを使用して細胞壁に関する酵素の遺伝子発現を行っています。
その際に加える試薬は2×のSYBR Green, cDNA, 10MのFwとRvプライマー、滅菌水なのですが、どれだけ加えるべきなのか分かる方がいらっしゃいましたら教えていただきたいです。

また、この装置で測定した結果を解析の際に相対定量を棒グラフに示したいのですが、どのようにソフトウェアのボタンを押せば良いのでしょうか。

研究室の先輩にqPCRを用いていた方がいないため、基本的な事が分かりません。よろしくお願いいたします。
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