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T7ポリメラーゼの転写開始点について
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No.9245-TOPIC - 2020/10/21 (水) 17:45:43 -
あ
T7ポリメラーゼでin vitroでRNAを合成する際、マニュアルにはプロモーターの後のGGGの最初のGから転写が始まると書いてあります。しかし、作りたい転写産物の配列の都合上GNN(N=G以外)から始めたいのですがこれでもちゃんとしたRNAができるのでしょうか?
一応実際にやってみた結果、一定量とれてだいたいほしい位置にバンドも出たのですが、ちゃんと目的の位置から転写が始まっているのか一抹の不安がよぎりました。キットはinvitrogenのメガスクリプトT7を使っています。
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(無題)
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No.9245-3 - 2020/10/22 (木) 05:00:49 - おお
http://parts.igem.org/Promoters/Catalog/T7
GのかわりにAが来ることはまあまああるようです。
(無題)
削除/引用
No.9245-2 - 2020/10/22 (木) 04:43:02 - おお
T7プロモーターをキャラクタライズした文献を漁れば何らかの事が見えてくると思いますけどね、、、まあ結構古い文献を漁ることになると思うけど(1980年代とか、、、)
ミューテーション入れてどこが重要だとか調べたりしていると思うので。
T7ポリメラーゼの転写開始点について
削除/引用
No.9245-1 - 2020/10/21 (水) 17:45:43 -
あ
T7ポリメラーゼでin vitroでRNAを合成する際、マニュアルにはプロモーターの後のGGGの最初のGから転写が始まると書いてあります。しかし、作りたい転写産物の配列の都合上GNN(N=G以外)から始めたいのですがこれでもちゃんとしたRNAができるのでしょうか?
一応実際にやってみた結果、一定量とれてだいたいほしい位置にバンドも出たのですが、ちゃんと目的の位置から転写が始まっているのか一抹の不安がよぎりました。キットはinvitrogenのメガスクリプトT7を使っています。
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