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(無題) 削除/引用 No.923-10 - 2012/09/13 (木) 23:39:27 - おお http://en.wikipedia.org/wiki/Taq_polymerase http://www.clontech.com/takara/US/Products/PCR_Products/High_Performance_PCR/LA_Taq_DNA_Polymerase あ、APさんがただしかった。

(無題) 削除/引用 No.923-9 - 2012/09/13 (木) 17:40:46 - AP >同様に天然のTAQはヌクレアーゼ活性がありproof readingの機能をもっていますが、売られている普通のTAQはヌクレアーゼ活性を取り除いています(確かでリーションだったとおもうのですが)。 うっそだぁ。 TakaraのLA PCRののproof readingの付与の仕方は非公開ですが、おそらく3' exo活性をもつ酵素を混合していると思われます（Taqベースの系では、これ以外にプルーフリーディング活性を持たせる方法は、いまだに無いはずです）。TakaraのLA PCRの説明を読んで、誤解されたのかもしれませんが（意図的にぼかして、あえて誤読を招くように書かれているようにみえる）、Taqがもともと持っている校正活性を利用している（残している）とは言っていないでしょう？ なお、Taqから二本鎖特異的5' exoの活性(いわゆるnick translation活性）を遺伝子工学的に取り除いたヴァージョンはあります。

(無題) 削除/引用 No.923-8 - 2012/09/13 (木) 17:13:23 - ~ みなさま、 いろいろご教示やサイトの紹介してくださりまことにありがとうございました。 改めて勉強になりました。 今後とも、よろしくおねがいいたします。

(無題) 削除/引用 No.923-7 - 2012/09/13 (木) 16:57:10 - おお LAーTAQとかはproof readingの機能をほじしてますね。同様に天然のTAQはヌクレアーゼ活性がありproof readingの機能をもっていますが、売られている普通のTAQはヌクレアーゼ活性を取り除いています(確かでリーションだったとおもうのですが)。

(無題) 削除/引用 No.923-6 - 2012/09/13 (木) 16:54:13 - AP Taq polymeraseにnon-proof readingタイプなものとproof readingタイプなものがあるというわけではなく、Taq polymeraseはnon-proof readingなものです。文脈のなかでnon-proof readingであることを明示的にするためにそういう書き方をしたのではないでしょうか。 はるか昔、関係代名詞の制限用法と非制限用法というのを習いましたが、 Taq polymerase which is "non-proof reading"というニュアンスではなく、 Taq polymerase, which is "non-proof reading"が意図するところでしょう。 言うまでもなく、proof reading activity 校正活性というのは、ポリメラーゼが間違った塩基を取り込んで伸長してしまったとき、その末端のミスマッチをすぐさま削りとる、そのポリメラーゼ自身が有する3' exonuclease活性のことです。

ヒント 削除/引用 No.923-4 - 2012/09/13 (木) 16:43:52 - たろう New England Biolabs (NEB)のカタログに説明があります。

(無題) 削除/引用 No.923-3 - 2012/09/13 (木) 16:38:41 - おお ヒント ポリメラーゼのエキソヌクレアーゼ活性 fidelity wikiにでも解説が載ってるかもしれませんよ。

(無題) 削除/引用 No.923-2 - 2012/09/13 (木) 16:11:18 - qq 通常のTaqは、“non-proof reading”Taq polymeraseです。

Taq polymeraseについて 削除/引用 No.923-1 - 2012/09/13 (木) 15:56:19 - ~ いつも参考にさせてもらってます。 早速ですが、 PCRに使用するpolymeraseで、“non-proof reading”Taq polymeraseとは何でしょうか？通常のTaqとどのような特性の違いがあるのでしょうか？ ご教示ください。

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