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(無題) 削除/引用 No.9216-5 - 2020/10/13 (火) 13:53:16 - phos >>WWW様 やはり市販のインヒビターカクテルなどを用いた方がよいのですかね・・ 一度教官に相談して、購入も検討してみます。 ご回答ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.9216-4 - 2020/10/13 (火) 13:45:28 - TS イミダゾール、フッ化ナトリウム、グリセロリン酸ナトリウム、モリブデン酸ナトリウム、バナジン酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、くらいかな。 こういうのをまねています。 https://www.nacalai.co.jp/ss/ec/EC-srchdetl.cfm?Dum=1&syohin=0757461&syubetsu=3 リン酸化を見るとはいっても、Protease inhibitorも入れないといけないと思います。

(無題) 削除/引用 No.9216-3 - 2020/10/13 (火) 13:44:27 - qq このLysis bufferは溶けて透明になっていますか？ MgCl2が濃いような気がするのだけど、特別な理由があるのでしょうかね。 2%のNaFは、0.47Mくらいだけど、濃すぎないですか？

(無題) 削除/引用 No.9216-2 - 2020/10/13 (火) 13:33:38 - WWW 私の研究室ではRIPA bufferにロシュのホスファターゼインヒビター（PhosSTOP）を入れています．

Westernblottによるリン酸化検出の最適条件について。Bufferなど 削除/引用 No.9216-1 - 2020/10/13 (火) 13:24:37 - phos こんにちは。 当方大学にてタンパク質のリン酸化修飾について研究をしている学生です。 初歩的な質問になってしまい、大変恐縮なのですが知恵をお借りできればと思います。 現在、細胞からLysateをとってきてあるタンパク質のリン酸化の状態をwesternblottによって定量しようとしているのですが、いまいちバンドがうまく検出されず困っています。 このタンパクについては先行の研究によってある程度細胞内でリン酸化されていること、また有効な抗体についても分かっています。 そこで質問なのですが、リン酸化修飾を研究されている皆様はどのような組成のBufferでLysateを調製されていますか？ご教授いただければ幸いです。 また以下のBufferについて改良すべき点、手際など気を付ける点があればそちらも教えていただけるとありがたいです。 fc Tris-Cl(pH7.5) 20mM NaCl 1% Triton-X 0.5% sodium Deoxycholate 0.5% SDS 0.1% MgCl2 10mM EDTA 1mM このBufferにとりあえず、ラボにあったNaF,β-GlycerophosphateをfcでそれぞれPP阻害剤として2%になるよう加えて使用してます。 稚拙な乱文お許しください。どうぞよろしくお願いいたします。

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