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位相差顕微鏡で96wellの細胞が見えない件 トピック削除
No.9201-TOPIC - 2020/10/06 (火) 16:09:25 - x cfvgbhyuji
位相差顕微鏡で96-well plateだと細胞が非常に見えにくい(位相差でない普通の顕微鏡で細胞見たようなにな感じ)のですがどうしたら普通に見えますか。他のdishや24-well plateは普通に見えます。
 
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(無題) 削除/引用
No.9201-12 - 2020/10/12 (月) 00:55:58 - おお
https://www.eppendorf.com/product-media/doc/en/105707/Eppendorf_Consumables_Application-Note_330_Cell-Culture-Consumables_Improved-optical-performance-facilitates-microscopic-analysis-cells.pdf

こんなのもあるね。

(無題) 削除/引用
No.9201-11 - 2020/10/09 (金) 10:55:16 - s
ここに解説があります。
https://ibidi.com/img/cms/support/references/E_Horn_PhaseContrastLightMicroscopy_2006.pdf

端がメニスカスになる以上、見えにくいのは仕方ないという認識です。
逆に、ちゃんと見えてるっていう人は注意不足なんじゃないかと思う。

(無題) 削除/引用
No.9201-10 - 2020/10/09 (金) 05:03:54 - R
>[Re:1] x cfvgbhyujiさんは書きました :
> 他のdishや24-well plateは普通に見えます。

きちんと読んでいませんでした。他のディッシュだと見えるんですね。じゃぁ96穴のカバーが曇っているとか?連投すみませんね。

(無題) 削除/引用
No.9201-9 - 2020/10/09 (金) 01:14:27 - R
>[Re:8] Rさんは書きました :
> たぶんリングスリットが合ってないんじゃないですか?

あるいは対物レンズ自体が位相差用でないとか。

(無題) 削除/引用
No.9201-8 - 2020/10/08 (木) 23:54:25 - R
たぶんリングスリットが合ってないんじゃないですか?

(無題) 削除/引用
No.9201-7 - 2020/10/08 (木) 17:46:54 - TS
全く見えないということはない気もしますが、
96ウェルの場合、見えるところはウェルの中心のかなり限定的な範囲になりませんかね(うちではそうです)。
詳しく理解できているわけではないですが、位相差の場合、光の屈折とか回折がかかわるので、ウェルの壁に近いところが見えにくくなり、それはどのサイズのプレートでも同じと思っています。

(無題) 削除/引用
No.9201-6 - 2020/10/08 (木) 13:19:14 - 念のため
平底ですよね

(無題) 削除/引用
No.9201-5 - 2020/10/08 (木) 11:46:42 - x+cfvgbhyuji
はい、下から見る方のです。培地の量で見え方すごく変わる感じがしました。入れすぎでしょうか。コンデンサもこれでOKと言われ、ていうかこれが全然普通の見え方だとか言われたのですが、いやいや細胞よく見えないし幾ら何でもんなことないだろうとか思い聞きました。すいません。

(無題) 削除/引用
No.9201-4 - 2020/10/06 (火) 18:20:52 - rxfd
念のため確認ですが倒立顕微鏡ですよね?
位相差倒立顕微鏡で通常の培地量(100ul)を入れた96ウェルプレートの観察に困った経験はないのですが(ウェルの端はメニスカスのためきれいに見えませんが)、コンデンサレンズの調整が狂っていたりしないでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.9201-3 - 2020/10/06 (火) 17:17:52 - alll
私もこの現象に悩まされたことがあります。

培地のapply volumeは100 uLでしょうか?
apply量を200 uL / wellにすると培地の表面張力の問題なら多少なり改善すると思います。

(無題) 削除/引用
No.9201-2 - 2020/10/06 (火) 16:13:59 - f
対物レンズのworking distance?

位相差顕微鏡で96wellの細胞が見えない件 削除/引用
No.9201-1 - 2020/10/06 (火) 16:09:25 - x cfvgbhyuji
位相差顕微鏡で96-well plateだと細胞が非常に見えにくい(位相差でない普通の顕微鏡で細胞見たようなにな感じ)のですがどうしたら普通に見えますか。他のdishや24-well plateは普通に見えます。

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