Bio Technical フォーラム

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Gquadruplexの作製 トピック削除
No.9188-TOPIC - 2020/09/29 (火) 15:50:22 - k
いつもお世話になっております。

私は現在Gquadruplexについて研究をしています。その研究のなかでGquadruplexをvitroで作製する必要がありますが、この作製がうまくいかず困っています。Gquadruplexを作製したことがあるというかたがいらっしゃれば是非ともその手法やバッファーの組成などご教授いただけると幸いです。

以下私が現在用いているプロトコルです
500mM TrisOAc pH7.5     (final.20mM)
2M   グルタミン酸カリウム (final.50mM)
1M   MgCl2 (final.10mM)
10mM  DTT (final.1mM)
10×TE (final.1×)
G4DNA            (final.1μM)

上記を混合し滅菌ミリQ水で100μlにメスアップ。
95℃、10min インキュベート
95℃から25℃までゆっくりと温度を下げる(−1℃/min)
 
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(無題) 削除/引用
No.9188-2 - 2020/09/30 (水) 05:36:08 - おお
経験はないのですが、参考にした文献はありますか?配列はその文献と全く一緒ですか?

Gquadruplexの作製 削除/引用
No.9188-1 - 2020/09/29 (火) 15:50:22 - k
いつもお世話になっております。

私は現在Gquadruplexについて研究をしています。その研究のなかでGquadruplexをvitroで作製する必要がありますが、この作製がうまくいかず困っています。Gquadruplexを作製したことがあるというかたがいらっしゃれば是非ともその手法やバッファーの組成などご教授いただけると幸いです。

以下私が現在用いているプロトコルです
500mM TrisOAc pH7.5     (final.20mM)
2M   グルタミン酸カリウム (final.50mM)
1M   MgCl2 (final.10mM)
10mM  DTT (final.1mM)
10×TE (final.1×)
G4DNA            (final.1μM)

上記を混合し滅菌ミリQ水で100μlにメスアップ。
95℃、10min インキュベート
95℃から25℃までゆっくりと温度を下げる(−1℃/min)

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