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P2A配列を用いた2遺伝子のinfusion トピック削除
No.9124-TOPIC - 2020/08/31 (月) 11:29:30 - でつ
P2A配列を15塩基ほどオーバーラップさせて、遺伝子Aと遺伝子Bをプラスミドにinfusionしたいと思っているのですが、P2Aのアミノ酸配列さえあっていれば塩基配列は自由なものを使って良いのでしょうか？

トランスフェクションする細胞はHeLa細胞へする予定です。
また塩基配列を自由なものを使うというのは、例えばグリシンに対応する塩基配列としてGGCでもGGAでも自由に使ってよいのかという質問です。
　
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No.9124-5 - 2020/11/30 (月) 12:07:40 - ななしのひと
ご参考までに、私が 293T細胞で使用したものです。

GGTTCCGGAGCCACGAACTTCTCTCTGTTAAAGCAAGCAGGAGACGTGGAAGAAAACCCCGGTCCTAT

(無題) 削除/引用
No.9124-4 - 2020/11/30 (月) 08:39:03 - ななしのひと
自己分解ペプチドと言われていましたが、最近はリボソームスキッピングと言われていますね。

既報の通り作ったほうが良いと思います。

同じことを行いましたが、私は既報通り作りました。

(無題) 削除/引用
No.9124-3 - 2020/11/30 (月) 01:28:20 - たろー
P2Aは塩基配列が重要です

(無題) 削除/引用
No.9124-2 - 2020/09/01 (火) 07:12:55 - おお
やってみないとわからないかなとおもいます。２Aペプチドファミリーの配列が比べてあった文献ではDNA配列はすべてNPGの部分はすべて一致してました（その後のPもたしかそうだったとおもう）。

じつはペプチドができてから切断されているのではなく、Gのところでリボソーム tRNAコンプレックスがペプチドを放出してしまうので、後半のPから始まるタンパク質ができてしまうようです。ちがうtRNAが来るとうまくいくのだろうかという不安があるにはあります。

P2A配列を用いた2遺伝子のinfusion 削除/引用
No.9124-1 - 2020/08/31 (月) 11:29:30 - でつ
P2A配列を15塩基ほどオーバーラップさせて、遺伝子Aと遺伝子Bをプラスミドにinfusionしたいと思っているのですが、P2Aのアミノ酸配列さえあっていれば塩基配列は自由なものを使って良いのでしょうか？

トランスフェクションする細胞はHeLa細胞へする予定です。
また塩基配列を自由なものを使うというのは、例えばグリシンに対応する塩基配列としてGGCでもGGAでも自由に使ってよいのかという質問です。
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