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ありがとうございます 削除/引用 No.9105-7 - 2020/08/28 (金) 20:32:57 - jo メーカーに問い合わせて原因含め追及しています。 別ロットを出してもらうか、良質なポジコンがあれば提供いただけるかも問い合わせています。 ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.9105-6 - 2020/08/26 (水) 21:04:10 - sxdcfvgyふ メーカーに事情を伝えて、代替品か別ロットを出してもらえるか聞いた方がいいです。最近は良心的な対応してくれるところ多いです。そのロットが良くないならば、多分他からも同様の苦情が来てると思うので迅速に対応してくれます。もし忙しければ代理店さんを介して聞いてもらうこともできます。

(無題) 削除/引用 No.9105-5 - 2020/08/26 (水) 20:39:15 - jo 色々とご提案いただきありがとうございます。 やはり一次抗体かもしれません、ポリクローナル抗体できちんと冷凍保存していたのですが。買ったばかりでこうなってしまうのであればショックです。

(無題) 削除/引用 No.9105-4 - 2020/08/26 (水) 17:26:37 - sxdcfvgyふ 抗体は失活始まるとあという間にダメになります。先週までいい感じだったのに今週シグナルでない、みたいな感じは何度か経験してます。リン酸化部位抗体だとモノクロかモノスペシフィクのポリクロと思うのでそういうのがよりはっきりわかります。

(無題) 削除/引用 No.9105-3 - 2020/08/26 (水) 08:36:23 - TS どこまでうまくいっているのか確認していますか。 ゲルはちゃんと流れていますか。メンブレンにタンパク質は移っていますか。 CBBやPonceauSですぐに確認できます。 これらが問題なければ、抗体反応かECLキット、ケミルミの装置の問題と考えられると思います。 他のタンパクがちゃんと検出できていれば、一次抗体の可能性が高いかももしれません。

(無題) 削除/引用 No.9105-2 - 2020/08/26 (水) 08:27:15 - おお ケミルミのキットはワークしていますか？２次抗体のHRPの活性は落ちてませんか？ SDSの沈殿の影響はなんとも言えないけど大丈夫なことも結構あると思います。なぜゆえ突然沈殿したのかという疑問は抱かないのかとおもうけど。一度保存したものなら低温で沈殿しやすくはなるけど温めてやれば大丈夫だと思う。またカリウムイオンやグアニジンはSDSと相性が悪く沈殿するけど心当たりはありますか？ 前にうまく行ったサンプルを保存していたなら同時に流してみるのも手だと思います。

SDS PAGEに関しまして 削除/引用 No.9105-1 - 2020/08/26 (水) 06:37:58 - jo ウェスタンブロットを現在行っていて、方法は全く変えていませんが、今まで出ていたリン酸化抗体のバンドが急に出なくなってしまいました。ゲルはプレキャストを使用しています。ブロッキングの方法を変えたり、抗体の濃度を変えて試したり、can get signal を使用してみたりしていますがバンドか全く出ません。 一つ気になったのが、泳動バッファーに析出がありSDSの析出ではないかと思っています。SDSの析出があるバッファーで泳動しブロットを行うとどの様な事が起きるかご存知の方はいらっしゃるでしょうか？よろしくお願いします。

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