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(無題) 削除/引用 No.9090-4 - 2020/08/22 (土) 01:25:36 - おお 経験ある方のコメントがあれば助かるのだけど、そもそも未分化でqPCRして全く検出できないものなんでしょうか。参考にしている論文があれば確認してみてもいいかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.9090-3 - 2020/08/21 (金) 23:08:14 - あいみゃん やはりコンフルエントに達していないのが原因でしょうか？ 目視で変化が起きているので安心していました。 はい、先方のプロトコルどおりT3を入れております。 PGC1aも発現なしです。

(無題) 削除/引用 No.9090-2 - 2020/08/21 (金) 15:52:58 - み 褐色自防組織由来のpreadipocytesから分化させているのでしょうか？ preadipocytesや3t3-L1などからの白色脂肪細胞への分化もそうですけど、コンフルエントにさせた後、数日維持培養してから分化開始しないと分化効率悪いですよね。 「蒔いた細胞がwellに対して少ない」というコメントが気になります。 それと、褐色脂肪への分化はT3とか甲状腺ホルモンなど必要だったと思いますが、その辺りの条件は問題ないですか？ PGC-1の誘導はどうですか？ 頂きものということは先方に詳細なプロトコールが存在するのでは？

分化マーカーが検出できない　培養細胞 削除/引用 No.9090-1 - 2020/08/21 (金) 15:37:26 - あいみゃん お世話になっております。 褐色脂肪細胞を培養しているのですが、UCP1などの分化後のマーカーがリアルタイムPCRにて検出することができません。メディウムの調整は間違っていないと思いますし、顕微鏡で目視では脂肪滴を有する細胞を確認できています。 どのような原因が考えられるでしょうか？ 私が考えているのは、蒔いた細胞がwellに対して少ない（そのため分化準備不十分のまま分化させている）のでは？と思っています。これも原因になりうるでしょうか？ あるいはP30を使っている点でしょうか・・・・？いただきものなのでこれはどうしようもできませんが。。。。。

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