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レポータープラスミドの作製方法 トピック削除
No.9077-TOPIC - 2020/08/14 (金) 07:47:18 - はるたん
いつもお世話になっております。
この度、レポータープラスミドを作製することになり、
ご意見を伺いたいです。

現在、こちらのルシフェラーゼプラスミドを持っております。

addgene.org/browse/sequence/274441/

とあるヒト遺伝子Aの発現をレポーターアッセイで確認することを検討しています。
具体的には上記のプラスミドのCMVenhancer-CMVpromoterの領域をMluIとHindIIIでカットし、遺伝子Aのプロモーター領域を組み込みます。
遺伝子Aのプロモーター領域は論文で報告されています。

このプラスミドの構造で本当に正しいのかどうか確証が得たく質問させて頂きました。詳しい方がおりましたら教えて頂けると有り難いです。
どうぞ宜しくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.9077-3 - 2020/08/15 (土) 09:04:10 - はるたん
おおさん

有難うございます。
仰るとおりレポータープラスミドを改変したほうが良さそうですね。

(無題) 削除/引用
No.9077-2 - 2020/08/14 (金) 07:59:44 - おお
たしかHindIIIの上流にTranscriptional Start Siteがあります。そこは注意をする必要があります。
このようなプラスミドよりもReporter Assay用のプラスミドを使う方が確実だと思いますけど。

レポータープラスミドの作製方法 削除/引用
No.9077-1 - 2020/08/14 (金) 07:47:18 - はるたん
いつもお世話になっております。
この度、レポータープラスミドを作製することになり、
ご意見を伺いたいです。

現在、こちらのルシフェラーゼプラスミドを持っております。

addgene.org/browse/sequence/274441/

とあるヒト遺伝子Aの発現をレポーターアッセイで確認することを検討しています。
具体的には上記のプラスミドのCMVenhancer-CMVpromoterの領域をMluIとHindIIIでカットし、遺伝子Aのプロモーター領域を組み込みます。
遺伝子Aのプロモーター領域は論文で報告されています。

このプラスミドの構造で本当に正しいのかどうか確証が得たく質問させて頂きました。詳しい方がおりましたら教えて頂けると有り難いです。
どうぞ宜しくお願いいたします。

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