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(無題) 削除/引用 No.9053-6 - 2020/08/03 (月) 18:58:52 - Skeptic 夏休みの課題？

(無題) 削除/引用 No.9053-5 - 2020/08/03 (月) 16:38:41 - AA 最初の変性ってだいたい2−5分くらいのプロトコルが多いように思います。 最近は多くの酵素がホットスタートになってきているので、ここを適当にやるとかからないこともあるのかなと思います。 やむを得ずホルマリン固定サンプルから採取したDNAを鋳型にするときなどははじめに15分くらい95度に置いておいたりします。 すでに指摘にある通り、ケースバイケースですね。

(無題) 削除/引用 No.9053-4 - 2020/08/03 (月) 15:09:56 - G25 ケースバイケース。個人やラボの流儀、使っている酵素の特性なんかも関係してくる。 PCRの初発ではPCR産物ではなくゲノムDNAやプラスミド DNAなど熱解離のカイネティクスの低い鋳型を解離させなきゃならないし、精製度の低い DNAや細胞や菌体内のDNAを鋳型にするときには、DNaseなどの熱失活や細胞破壊のため十分に加熱しなきゃならないので、サイクル前の熱処理時間は長めにするものだが、 それとは別に、 最近のPCR用酵素は抗体でブロックしたり、タンパク質工学的に熱感受性にしたりして、熱処理されるまで活性をブロックしてHS (hot start)させるものが普通になってきた。そう言う酵素では、プレサイクルの熱処理をある程度十分にとるのが推奨されていたりする。 >pcrにおいて鋳型DNAを94度で初期変性する時間は30〜60秒だが これは普通のPCRにしても短いほうだとおもう。

(無題) 削除/引用 No.9053-3 - 2020/08/03 (月) 07:13:01 - おお 大腸菌からのExtractionというか大腸菌を壊してプラスミドを溶液中に出すという考え方だと思う。少し長く置くので、プラスミドも局所的にあるような状態から拡散しているだろうし。ただし別にそんなに長くする必要もないかもしれない。普通の条件でもかかってるし。 https://www.csun.edu/~mls42367/Protocols/Colony%20PCR.pdf

(無題) 削除/引用 No.9053-2 - 2020/08/02 (日) 20:27:46 - み そんな決まりはないと思います。 そもそもPCRの鋳型ってどんな物を使用しているのでしょうか。 酵素の種類やtemplateの長さに応じて適宜調節するものだと思うので、あなたのPCRの詳細が分からない段階では何とも言えない。

コロニーPCRの初期変性時間 削除/引用 No.9053-1 - 2020/08/02 (日) 12:59:30 - でつ pcrにおいて鋳型DNAを94度で初期変性する時間は30〜60秒だが、コロニーPCRの時は180〜300秒と長いのは何故ですか？

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