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(無題) 削除/引用 No.9034-3 - 2020/07/25 (土) 10:45:26 - M F4/80という事は、マウスだと思うのですが、組織は何でしょう？ ヒトのマクロファージでCD4発現が見られる事は昔から言われていますが、マウスでも腸のマクロファージでCD4の発現があるとの報告があったような気がします。また、マクロファージは自家蛍光が高かったりしますので、ネガコンの評価は重要と思います。 マウスであれば新鮮なサンプルを採取可能だと思うので、Fc block及びPFA固定の有無でどうなるか、FACSで確認してはどうでしょう？ 個人的には、固定した組織マクロファージの免疫染色にFc blockは使ってませんが、トピ主さんとは実験条件が異なるでしょうから、ご自身の実験条件でどうなるか、確認された方が確実と思います。

(無題) 削除/引用 No.9034-2 - 2020/07/24 (金) 21:58:58 - 染色乙 normal IgGあるいはnon-related IgGを１次抗体としたnegative controlではどのようになっていますか。それによってnon-specific stainingかどうかが容易に判別できます。 Fc receptorと抗体との結合はnormal serum によるblockingあるいはFc blockerで抑える必要があるという説（従来から言われてきたこと）と、実際にはほとんどnon-specific stainingには関与していない（割と最近言われていること）という説があり、はっきりしません。 CD4陽性（CD8陽性も）macrophageはすでに報告ありますので、別にそれ自体は必ずしもおかしなことではないと思います。macrophage（他の免疫細胞もしばしばそうですが）はM1,M0 M2始め種類が細かく色々あってそれぞれ発現マーカーも流動的に少しずつ変わるので、画一的にこれが発現していなくていはならないとか、していてはおかしいとかいう見方はしない方がいいと思います。 Ref) CD4+/CD8+ macrophages infiltrating at inflammatory sites: a population of monocytes/macrophages with a cytotoxic phenotype. Baba T et al. Blood 2006

組織染色にFc受容体ブロックは必要でしょうか？ 削除/引用 No.9034-1 - 2020/07/24 (金) 12:10:10 - TCP お世話になります。 組織染色でCD4がF4/80陽性のものに染まっています。 形態的にリンパ球ではなく、マクロファージのようです。 これらのことからCD4抗体がマクロファージに結合してしまっているという可能性を一つ考えていますが、組織染色（PFA固定した凍結切片）の場合でもFc受容体が働いてしまいノンスペの原因になる、というのは一般的な考えでしょうか？ 私の理解ではフローサイトメトリーのような生細胞では問題になるようですが、固定した組織でも非特異的な原因になるかが知りたいです。 マクロファージを興味対象とされておられる方がいらっしゃいましたら、どのような組織染色方法を行われてるかご教示いただけますと幸甚です。

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