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(無題) 削除/引用 No.8922-6 - 2020/06/18 (木) 19:33:12 - gvhbjuio 誰がいつ買ったのかわからないくらい古いPVDFを大掃除中に発見して、即getしてそれを半年くらい使ってますが結果は新品と変わりません、やっぱ抗体とかそういう関係が原因と思いますので、あれこれ考えても時間たつだけなのですぐ買い直したほうがいいと思いますが前にBGが上がっていて汚くなって、で、ECLを新しくしたら解決したことあります。ECLが古いか変なふうになってるとかないですか。

(無題) 削除/引用 No.8922-5 - 2020/06/15 (月) 15:32:07 - おお 隣のラボから１回分分けてもらうとか、サンプルがもらえるメーカーからサンプルもらうと貸して、平行してやってみたらどうか。 わたしは相当古いものを使った事がありますけど、使えました。

(無題) 削除/引用 No.8922-4 - 2020/06/15 (月) 15:03:47 - れんちん PVDFは疎水性の膜なので、いい加減な管理をしていると空気中を漂う疎水性物質がペタペタと膜についてしまう、というのをどこかで読みました。 きちんと保護紙でPVDF膜が管理されていますか？ 二次抗体の濃度を見直されてもいいかもですね。 あとは洗浄液に界面活性剤を入れ忘れていないかなど。

(無題) 削除/引用 No.8922-3 - 2020/06/15 (月) 13:56:31 - G25 ポジティブチャージのナイロンメンブレン（主に核酸ブロット用）だと、古くなると感度が下がったりバックグランドが上がると言われていましたが（確かメーカーの注意書きにも）、PVDFは安定なのでないと思いますね。

(無題) 削除/引用 No.8922-2 - 2020/06/15 (月) 13:38:02 - 774 ある抗体に対してだけですか、何に対してもですか。 ブロッキング剤のロットは変わっていませんか。 昔、同じ販売元でもスキムミルクの製造元が変わったらバックグラウンドが上がってしまったということがありました。 ポンソーとかで染めてみてトランスファーの問題か抗体以下の問題か確認してみたら。 膜の劣化で真っ黒になるってあまり聞かないですけどね。 容器からのコンタミというのも余程汚れていない限りないと思う(うちでは中性洗剤で洗っています)。

ウエスタンブロッティングのバックグラウンドの原因 削除/引用 No.8922-1 - 2020/06/15 (月) 12:37:00 - はむ お世話になっております。上手くいっていたウエスタンブロッティングがある時を境にバックグラウンドが上昇し、真っ黒になりました。1次抗体とブロッキング剤は新品を購入しましたが、変化なし。2次抗体（2年前に購入）の劣化と容器からのコンタミ（今まで水のみで軽く洗浄のみ）を疑ってるのですが、もう1つ気になる事があります。メンブレン(PVDF)ロールタイプの劣化など考えられますでしょうか？購入日は不明なのです。よろしくお願い致します。

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