全6件 ( 1 〜 6 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.8893-6 - 2020/06/08 (月) 11:50:48 - えっと あの、Fc融合タンパク質でのPNGaseF処理に関してですが、Fc部位のN型糖鎖を単に観ている可能性が高いのではないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.8893-5 - 2020/06/07 (日) 07:31:48 - NEB DDT様、おお様、 ありがとうございます。 なんということでしょう...添付文書に書かれてなかったと思っていましたが、情報が開示されていたとは... 大変未熟さを露呈させてしまいましたが、ありがとうございました。 とても助かりました。

(無題) 削除/引用 No.8893-4 - 2020/06/07 (日) 07:05:23 - おお 以下のように書いてますね 1X Glycoprotein Denaturing Buffer 0.5% SDS 40 mM DTT 1X NP-40 1% NP-40 in MilliQ-H2O Reaction Conditions 1X GlycoBuffer 2 Incubate at 37°C 1X GlycoBuffer 2 50 mM Sodium Phosphate (pH 7.5 @ 25°C) Storage Temperature -20°C Storage Conditions 20 mM Tris-HCl 50 mM NaCl 5 mM EDTA 50% Glycerol pH 7.5 @ 25°C Heat Inactivation 75°C for 10 min Molecular Weight Apparent: 36000 daltons

(無題) 削除/引用 No.8893-3 - 2020/06/07 (日) 06:52:39 - DTT https://international.neb.com/products/p0704-pngase-f#Protocols,%20Manuals%20&%20Usage_Datacards

(無題) 削除/引用 No.8893-2 - 2020/06/07 (日) 06:51:26 - DTT 付いてきてる反応液に０.4MDTTが入ってますよ。 Reagents Supplied with Enzyme:10X Glycoprotein Denaturing Buffer: (5% SDS, 0.4 M DTT)

PNGaseF (NEB) 削除/引用 No.8893-1 - 2020/06/07 (日) 05:51:49 - NEB 質問があります。 Fc融合タンパク質上の糖鎖構造を解析する目的で、PNGaseF処理を行いました。 コントロールとしてはPNGaseFを加えなかったものをネガコンにしました。 その後、更に2つに分け（合計4サンプル）、一方には還元剤を加え、もう一方には還元剤を加えないSDSサンプルバッファーを加えて、CBB染色を行いました。 1. PNGaseF -, 還元剤 - 2. PNGaseF +, 還元剤 - 3. PNGaseF -, 還元剤 + 4. PNGaseF +, 還元剤 + このFcタンパク質はダイマーとなるので、還元剤を加えない限り、110kDのバンドを示すことがわかっていますが、結果は1と3で50kD付近のバンドが出て、2と4では40kDのバンドがでました。 私は1では110 kDのバンドが出ると思っていたので驚いています。 これはPNGaseF（NEB社）のdenaturing bufferに還元剤が入っていることを示しているのでしょうか？ 調べてもバッファーの組成まで出てきませんので、もしご存知の方がいらっしゃいましたら、既知のことかそうでないかを教えていただけると幸いです。 よろしくお願いします。

全6件 ( 1 〜 6 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---