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(無題) 削除/引用 No.8844-7 - 2020/05/13 (水) 09:40:19 - ちき ライゲーション産物ではなくプラスミドで形質転換した場合、お手元のDH5αとXL1/TG1/JM109には大きな差がありますか。10^6 cfu/μgというのはどのstrainに何を導入した場合の話ですか。 それとは別に、目的とするクローンを10回以上の期待頻度で含むサイズのライブラリーができていて、増幅後のコロニー数もライブラリーサイズの10倍以上というような状況だとしたら、今のままで全然構わないと思います。

(無題) 削除/引用 No.8844-6 - 2020/05/12 (火) 20:59:28 - サカナXX 形質転換効率でいうと10^6cfu/ugぐらいになります。

(無題) 削除/引用 No.8844-5 - 2020/05/12 (火) 20:19:51 - あかね TG1にはエレポでいれなさい。 形質転換効率の問題でしょう。

(無題) 削除/引用 No.8844-4 - 2020/05/12 (火) 20:14:16 - 敦盛 「大量」じゃなくて具体的にいくつ（ぐらい）なのさ？

(無題) 削除/引用 No.8844-3 - 2020/05/12 (火) 20:01:19 - サカナXX 返信ありがとうございます。 コロニーは1つも生えてきませんでした。 以下に詳細を書きます。 ファージミドベクターを用いてライブラリーを作成しようと考えています。 ファージ感染させる必要があるためF因子を持つコンピに形質転換したいのですが、 F因子を持つxl1,tg1,jm109のどのコンピに形質転換してもコロニーが1つも生えてきません。 同じライゲーション産物をdh5aに形質転換した場合にはコロニーは大量に生え、コロニーpcrでも目的物のバンドが見えることを確認しました。 何が原因だと思われますか？もし検討がつきましたら教えて頂きたく思います。

(無題) 削除/引用 No.8844-2 - 2020/05/12 (火) 09:17:14 - ちき 正しいかどうかは目的次第でしょう。一般論として増幅を繰りかえせばライブラリーにはバイアスがかかり複雑度は低下します。それが目的に照らして許容範囲かどうかだけだと思います。 また、もし本当にコロニーが全く出なかったのなら何か間違えている可能性が高いです。そうではなく、形質転換効率が一桁あるいは二桁(あるいはそれ以上?)低いということを誇張して言っているだけなら、正確に書くべきだと思います。

ライブラリー 削除/引用 No.8844-1 - 2020/05/11 (月) 23:21:17 - サカナXX ライブラリーの作成を行っています。 以下の方法は正しいのでしょうか。 本来であればTG1等のＦ因子を持つコンピに直接形質転換したかったのですが、コロニーが全く生えず。 dh5aを介することでコロニーが沢山生えることが分かったため、 コロニーをかきとりプラスミド抽出し、それをTG1にいれています。 1,外来遺伝子を組み込んだベクターをdh5aに形質転換。 2,プレートにまく。 3,プレートからコロニーかきとり、miniprep。 4,miniprep後のプラスミドをTG1もしくはXL1に形質転換。 5,プレートにまく。 6,かきとってグリセロールストックにする。プラスミドライブラリーとする。

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