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(無題) 削除/引用 No.8818-4 - 2020/05/07 (木) 18:08:20 - 7744 774R様 手厳しいご意見ありがとうございます。 ただ、前回溶けなかった（余計なことをしてしまったせい？）ので、確かに溶けるというコメントがいただければ次回に向けて安心できると思った次第です。 Cayman chemicalにのマニュアルによりますと10 mg/mL in DMSO（約27 mM）まで溶けるとの記載を確認いたしました。 そうしましたら、前回溶けなかったのは、やはり一度PBSに加えてしまったせいという認識で良いでしょうか？ また、同社のマニュアルには 「DSS has a solubility of approximately 0.15 mg/ml in a 1:5 solution of DMSO:PBS (pH 7.2)」 とありました。 つまり、上記のように調製し、PBSに対してPBSの1/5量のDSS in DMSOを加えるケースでは、DSS濃度は0.4 mMが限界ということで合っておりますでしょうか？ そうしますと、クロスリンクを行う場合のDSS濃度2 mMというのは、どのように達成し得ますでしょうか？ ・特に、調製するDSS in DMSOの濃度 ・混ぜるPBSとDSS in DMSOの比 上記が良くわかりません。。。 経験者の立場から、実際の作業手順としてはどのようにされているのか御教授いただけましたら幸いです。 宜しくお願い致します。

(無題) 削除/引用 No.8818-2 - 2020/05/04 (月) 19:26:57 - 774R >最初のDMSOにはどの程度溶けますでしょうか？（20 mMや40 mMでも溶けますでしょうか？） マニュアル見たら書いてあるがな。

DSSを用いたクロスリンク 削除/引用 No.8818-1 - 2020/05/04 (月) 18:43:59 - 7744 いつも参考にさせていただいております。 この度、あるタンパク質のオリゴマーをウェスタンブロッティングにより検出する実験を行っております。 しかしながら、DSSでのクロスリンクのステップで不明点が出てきました。 DSSはThermofisherのものを使用しています（Cat. 21655） 質問なのですが、クロスリンクのステップで、DSSをfinal 2 mM in PBSで反応させるのですが、そもそもDSSはどのように調製すべきでしょうか？ 水には溶けないとありましたので、一度DMSOに溶解させた後にPBS等で希釈するという認識ですが、その場合、最初のDMSOにはどの程度溶けますでしょうか？（20 mMや40 mMでも溶けますでしょうか？） 先日、間違えてPBSで溶かしてしまったので、溶け残っているDSSを遠心して集め、PBSを捨てた後、DMSOで20 mMとなるように加えましたが、ほとんど溶けませんでした。 これは、一度PBSに入れてしまったせいで溶けなかったのでしょうか？ あるいは、最初から20 mMでは溶けませんか？ ちょうどDSSが無くなってしまったのでリトライできず困っており、実験計画を立てるにあたり、アドバイスを頂ければ幸いです。 宜しくお願い致します。

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