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(無題) 削除/引用 No.8746-6 - 2020/04/03 (金) 09:24:19 - asan ゲルが曲がる主な原因 1. ゲル濃度のムラ、質 2. サンプルの塩濃度の違い 3. 電気泳動時の抵抗による熱 が主な原因です。話を聞く感じでは2が一番大きい気はしますけど、実験上避けられないならばレーンを開けて流すとか、バッファー置換をよくやってタンパク質を流しすぎないとかで相対的な差を減らすとかでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.8746-5 - 2020/04/03 (金) 05:53:51 - おお >[Re:4] おおさんは書きました : > もしサンプルの問題なら、ゲルろ過のマイクロチューブタイプのスピンカラムを０・１ー０・５％SDSぐらいで平衡化して もしこれを考えるならばSDSは低温で沈殿する傾向が強いことを考慮してください。室温でやるのがベターだと感じます。

(無題) 削除/引用 No.8746-4 - 2020/04/03 (金) 05:48:18 - おお マーカーが同様の流れ方をしていないなら、ゲルや通電の問題ではないのかなという印象です。おそらく蛋白以外の夾雑物の影響が出ているのかと思います。TCAを使うと沈殿しても強い酸性になってしまうことも多いのでそのあたりも原因なのかもしれません。何でもいいですから単純なLysateを用意して、余裕あるサンプルと一緒に流して違いがあるか見てみるのもいいかもしれません。 もしサンプルの問題なら、ゲルろ過のマイクロチューブタイプのスピンカラムを０・１ー０・５％SDSぐらいで平衡化して（多分しなくても大丈夫だと思うけど）、混在する小分子を除けばうまくいくことは多いです。ただこういうのはいつもつきものですが、ロスや希釈されてしまったり、一見溶けているようでアグっているようなものがゲルに引っかかって落ちてこなかったりと言うこともあるので慎重に対応しないといけないでしょう。 もしタンパク量的に許されるなら希釈という手も考えてみていいのかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.8746-3 - 2020/04/02 (木) 19:57:17 - BlueComma SDS-PAGEはあまりやっていませんが、ちょっと調べてみたら「電圧が高い」状態でこのようになるそうです。 参考：http://catalog.takara-bio.co.jp/com/tech_info_detail.php?mode=1&masterid=M100003381

(無題) 削除/引用 No.8746-2 - 2020/04/02 (木) 19:02:52 - 2 泳動した試料そのもの、あるいは試料調製の家庭に原因があると思うので、細胞・組織→アルカリ抽出→TCA沈殿→電気泳動用試料の手順の詳細をなるべく省かずに書いてください。

SDS-PAGE泳動の歪み 削除/引用 No.8746-1 - 2020/04/02 (木) 11:41:11 - 春から SDS-PAGEでタンパク質サンプルを各ウェルに一定量ずつアプライし、10%アクリルアミドゲルを使用して泳動(定電流)を始めたところlower gelに入ったところあたりから逆にスマイリングし始めました。 タンパク質サンプルはアルカリ抽出、TCA沈殿によって作成し、 濃度にはばらつきがあったと思います。 皆様このような経験はありますでしょうか？ 解決策など教えていただけると幸いです。

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