全5件 ( 1 〜 5 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.8738-5 - 2020/03/30 (月) 12:58:29 - asan 一番簡単なのは、4つの遺伝子をそれぞれコトラすることです。 別々の細胞に個別に発現するのでは？という人がいるかもしれませんが、通常リポフェクション等の方法では、ありえないモル数のコピーが一緒になって入るので、4つ混ぜた場合にそれぞれ個別に発現することはほとんどありません。 2AやIresなどをつなげたり、bidirectional promoter等で発現させることは可能ですが、それぞれのトランスクリプトの安定性などの違いで量比を揃えるのが難しいため、現実的には混ぜて入れるのが一番現実的な方法だと思います。 同じコピー数を同じ細胞にインテグレートさせたいとかそういう場合はこの方法だと難しいが、通常それならばレンチウイルスとかでやった方が早いと思います。

(無題) 削除/引用 No.8738-4 - 2020/03/28 (土) 14:36:34 - ウイルス 経験的に最も正しい答えは「やってみないとわからない」だと思います。IRES、2A も交互に入れるとか、前二つを IRES、後ろを 2A にするとか、根拠のない理由で発現が変わる場合があります。４つの遺伝子を発現させている例やご自身の遺伝子の複数を発現させている例を論文で見て、同じ方法か、それをベースにした方法でやってみるしかないと思います。可能なら２つくらい違う方法を試して、良い方法をとるのがより良いですが。。。

(無題) 削除/引用 No.8738-3 - 2020/03/28 (土) 05:17:20 - おお dual expression vectorというのもあります。ほぼ左右対称に発現ユニットを持っていて、Transcriptionのレベルでは同等の発現量が期待できる用になっているようです。 IRES vectorは経験的に後ろは弱くなるような傾向があります。前の遺伝子の長さに依存するような気がしてます。そういう意味では2Aなどはベターかも知れませんがあまり経験がないので推測です。 蛋白の安定性なども加味すると、Transcriptionレベルで同等でも発現量に差がついてしまうでしょうし、その上でどの程度の差までが許容範囲かでもストラテジーが変わってくるかもしれません。 一時期ラボに来ていたポスドクは１つづつTransfectionして３つ、４つの遺伝子を前のラボで発現させてました。

(無題) 削除/引用 No.8738-2 - 2020/03/27 (金) 22:18:27 - コロナ 2Aです。

複数の遺伝子を発現させる最も良い方法は？ 削除/引用 No.8738-1 - 2020/03/27 (金) 20:15:15 - Momoko HeLa細胞で、４つの異なる遺伝子を同時に発現させたいのですが、IRES vectorがベストでしょうか？ よろしくお願いします。

全5件 ( 1 〜 5 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---