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(無題) 削除/引用 No.8724-2 - 2020/03/18 (水) 06:14:57 - おお あなたの使うプラスミドがどういう構成になっているのかわからないのでコメントしようがありません。SDとATGの距離も考えないといけないですし。 pETなどはN-termにタグがありそのスタートコドンがSDから丁度いいところに置かれています。もしN末のタグが邪魔だったらタグがスタートコドンからNde I（たしか、もしかしたらNco I）で切れるので、そこに発現したい蛋白のスタートコドンを当てるとSD-firstMetの発現開始に必要なStructureを維持してコンストラクトが組めます。 ま、これでも読む？ https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC523762/pdf/nar00047-0099.pdf

SD配列 削除/引用 No.8724-1 - 2020/03/18 (水) 00:54:55 - ぽこたん 質問よろしくお願いします。 これまでGST融合タンパク質を作製してきた経験がありますが、この度、GSTを付加しない、目的のタンパク質を大腸菌で発現させたいです。 そこで質問なのですが、大腸菌用のプラスミドをアドジーンや企業から入手するとして、MCSサイトには目的の遺伝子+その上流にはSD配列を付加する必要はありますでしょうか？ 哺乳動物で遺伝子を発現させる際にはコザック配列の付加が基本的だとは思いますが、大腸菌ではどうなのかなと疑問に思っています。企業のプラスミドにはSD配列はバックボーン側に付加されてることがほとんどでしょうか？

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