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(無題) 削除/引用 No.8693-5 - 2020/03/03 (火) 10:14:25 - meta+analysis 有難うございます。 ThermoFisherのホームページを見ますと、PE、APC,PerCPなどがMeOH sensitiveなようですね。私の場合は目的のタンパク質が核内にありますので、固定後に染色します。ですので色素が不活化される心配はありません。 ttps://www.thermofisher.com/us/en/home/references/protocols/cell-and-tissue-analysis/protocols/staining-intracellular-antigens-flow-cytometry.html 早速、目的の細胞内タンパク質をMeOH固定、0.5%BSAでブロック後にAlexa647-conjugate抗体で染色したのですが、仰るとおりバックグランドが異常に高くなってしまいました。。。 PFAではこのバックグランドは見られず、発現していないコントロール細胞群と発現している細胞群を明確に区別出来ていましたが、MeOHでは不可能でした。 ブロッキング剤を変える、抗体濃度を落としてみる、違うクローンの抗体を試してみるなど条件検討が必要そうです。この条件検討で改善されるかは謎ですが。。。

(無題) 削除/引用 No.8693-4 - 2020/03/03 (火) 09:00:57 - TK-1 あとは、PEとAPC、そのタンデムdyeは使いにくいか、使えない。

(無題) 削除/引用 No.8693-3 - 2020/03/03 (火) 08:13:52 - meta analysis asan様 ご助言有難うございます。 早速試してみたいと思います！

(無題) 削除/引用 No.8693-2 - 2020/03/02 (月) 13:40:48 - asan メタノールの方がバックが出やすいと言われてます。 また、表面抗体を利用する場合は、メタノールは染色パターンが大きく変わる可能性があるので、メタノールよりPFA+tritonなどの方法を使う人が多いのかもしれません。 それがクリアできれば、別に使えなくはないし、透過処理もできるので便利ではありますよ。

メタノール固定でFACS sorting 削除/引用 No.8693-1 - 2020/03/02 (月) 12:35:26 - meta analysis いつも勉強させて頂いております。 現在、とある理由から細胞をメタノールで固定後、染色、FACS sortingを行いたいと考えております。 ですが文献を調べますとほとんどの論文がPFA固定でフローサイトメトリー解析を行っております。 顕微鏡で観察する際にMeOHで固定、染色は一般的ですが、FACS sortingをする際は何か問題が出てくるのでしょうか。 どなたか詳しい方がおりましたらご教授いただけますと幸いです。

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