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(無題) 削除/引用 No.8683-9 - 2020/02/28 (金) 16:50:08 - ysg PCR産物のキャリーオーバー汚染の可能性もありますね。

(無題) 削除/引用 No.8683-8 - 2020/02/28 (金) 16:36:20 - おお 水でバンドが出るならプライマーダイマーじゃ…

(無題) 削除/引用 No.8683-7 - 2020/02/28 (金) 16:21:08 - いーちゃん 沢山の回答ありがとうございます。 水でのサンプルにも同様のバンドがでています。 上司に相談しました所、 「いままでそんなことがなかったから分からない」と言われ、 プライマーの検討もお話ししてみましたが、 その後の指示がまだされていないため、 モヤモヤします...

(無題) 削除/引用 No.8683-6 - 2020/02/28 (金) 01:14:47 - おお すでに何らかのアクションを起こしていると思えるぐらい昔のトピですが、 まず水などでもバンドが出ないのか確認する。 PCR条件を振ってみる。アニーリング温度や方法論としてタッチダウンとか。添加物等。 でもあなたの上司にまずは報告して解決方法を聞くのが筋ではあります。おそらくプライマーの再デザインをやることになるのかなとは思います。

(無題) 削除/引用 No.8683-5 - 2020/02/27 (木) 09:03:41 - s ネガコン用のDNAだとバンドが出て、水にしてるところは出てないんですよね？ そしたらそのDNAがネガティブじゃなかったか、プライマーが悪いってことで。 sampleとネガコンまでバンドが出てて水のところだけ出てない泳動の写真をもって、プライマーの設計を変えてくださいって依頼した先生のところに行けばいいかと。

(無題) 削除/引用 No.8683-4 - 2020/02/27 (木) 00:03:56 - 偏見 コントロールにバンドが出ないのが正しいのに 出て困るってことは酵素や装置、サイクルは機能してて プライマーの配列自体に問題がありそうだけど 1年目の新人テクニシャンというのがどの程度か知らないけれど プライマーの設計はテクニシャンを使う人が責任もってやることで （ソフトの使用権限とか配列確認の手間という意味でも） その人が「おそらくテクニシャンが混ぜるプライマーを間違えただけだろう」 から再調製してやり直させただけのような

(無題) 削除/引用 No.8683-3 - 2020/02/26 (水) 20:24:14 - AP 非特異的な産物がメジャーに増えていて、それを見ているという可能性がまず一番にでてきます。　標的遺伝子とは無関係な産物だから、遺伝子型に関係なく同じように出る。 プライマーを調製し直すったって、既存の大元ストックを出してきて希釈し直すとかでしょ。そのプライマーの中身自体に問題があったら同じこと。 可能性としては、 ・ラベルを取り違えていてラベルと中身が違っている。 ・中身はあっているが、そもそもデザインが良くない。 前者だったら、そのままの配列で注文しなおせばいいだけだけど、 後者のほうが遥かにありそうなこと。プライマーを設計し直して、新しく作り直すのが良いと思う。

(無題) 削除/引用 No.8683-2 - 2020/02/26 (水) 16:56:55 - いーちゃん 補足になりますが、 DNAは尻尾からアルカリ抽出を行っています。 また、R26RのPCRの時のみ結果がおかしいです。

PCRがうまくいかない... 削除/引用 No.8683-1 - 2020/02/26 (水) 16:54:22 - いーちゃん はじめまして。 組織学のラボでテクニシャンとして働いて1年目の新人です。 マウスのジェノタイピングとしてPCRを行っていますが、 ある特定のプライマーの時のみ、 全てノックアウトマウスのポジコンと同じようなバンドがでてしまいます。 ネガコンにしているものも同様にでます。 プライマーも新しく調整していますが、結果に変化はありません。 また、他のプライマーを使用して同じサーマルサイクラーで増幅した時は、 正しい結果がでるので、機械の故障も考えられないと思います。 何が原因なのか分かりません。 なにかヒントや解決策を教えていただけないでしょうか。 よろしくお願いします。

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