Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 新しいテーマで話を始める場合、質問をする場合は「新しいトピックを作る」から書き込みをしてください。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

新しいトピックを作る | トピック一覧 | 研究留学ネットに戻る

ひとつ前のフォーラム(readのみ)

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

質量分析前のゲル トピック削除
No.8679-TOPIC - 2020/02/25 (火) 09:15:21 - セル
大変お世話になっております。

SDS-PAGE後に銀染色を行い、MS解析をしております。
銀染色後にゲル片を切り出し、MS用銀染キット付属の
脱色液で脱色し、その後超純水で5回ほど洗い、
超純水に浸したまま4℃で保存しております。
MS解析に移るまでの保存期間は2〜4週間ほどです。

先日質量分析経験者に「その保存ではゲルから蛋白が
出てしまうのではないか?酢酸・メタノールなどの
固定液に置換した方がよいのではないか?」と言われ
気になっております。
保存期間が長い場合はどのような保存が一番よいのでしょうか?

1)超純水で洗浄後、超純水内で保存で大丈夫
2)超純水で洗浄後、超純水を除き、ゲル片だけにして冷蔵
3)超純水で洗浄後、真空乾燥して常温保存
4)超純水で洗浄後、固定液に移し4℃保存

以上が候補として考えられると思うのですが、
経験がおありのかた教えていただけますでしょうか?
よろしくお願いいたします。
 
- このトピックにメッセージを投稿する -



3件 ( 1 〜 3 )  前 | 次  1/ 1. /1


(無題) 削除/引用
No.8679-3 - 2020/02/25 (火) 10:31:35 - 1
SDS-PAGEのゲルからタンパク質を溶出するには、かなり激しい方法(SDS溶液中で加熱とか)でも回収率は非常に低くて苦労するくらいなので、普通の水の中で自然の拡散でゲルから出て行ってしまいロスするという心配はあまり現実的でないように思います。LC-MS/MSの分析ならば、溶液に浸けておく必要はなくて、切り出したゲル片をチューブに入れてそのまま−20〜ー30℃の冷凍庫に入れておけば良いと思います。今までずっとそうしていますが、特に支障はないです。分析先に送るときはこれをクール(4C)便で郵送しています。

(無題) 削除/引用
No.8679-2 - 2020/02/25 (火) 09:22:35 - み
2で問題になったことはない。
水に浸った状態だとゲルから滲み出るだろう。

質量分析前のゲル 削除/引用
No.8679-1 - 2020/02/25 (火) 09:15:21 - セル
大変お世話になっております。

SDS-PAGE後に銀染色を行い、MS解析をしております。
銀染色後にゲル片を切り出し、MS用銀染キット付属の
脱色液で脱色し、その後超純水で5回ほど洗い、
超純水に浸したまま4℃で保存しております。
MS解析に移るまでの保存期間は2〜4週間ほどです。

先日質量分析経験者に「その保存ではゲルから蛋白が
出てしまうのではないか?酢酸・メタノールなどの
固定液に置換した方がよいのではないか?」と言われ
気になっております。
保存期間が長い場合はどのような保存が一番よいのでしょうか?

1)超純水で洗浄後、超純水内で保存で大丈夫
2)超純水で洗浄後、超純水を除き、ゲル片だけにして冷蔵
3)超純水で洗浄後、真空乾燥して常温保存
4)超純水で洗浄後、固定液に移し4℃保存

以上が候補として考えられると思うのですが、
経験がおありのかた教えていただけますでしょうか?
よろしくお願いいたします。

3件 ( 1 〜 3 )  前 | 次  1/ 1. /1


パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する
名前 
メール   アドレス非公開
   タイトル 
本文      
設定  クッキーを保存(次回の入力の手間を省けます)
上に上げない(トピックの一覧で一番上に移動させません)
解決(問題が解決した際にチェックしてください)
暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。
送信 

〔使い方〕
  • 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。
  • 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。
  • 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。