Bio Technical フォーラム

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WBのリプロービング トピック削除
No.8633-TOPIC - 2020/02/07 (金) 13:00:54 - おおお
お世話になっております。
学部四年生のものです。

WBでリン酸化、脱リン酸化タンパクを見たいとき、りぷーびんぐをするのと、ゲル二枚で行うのはどちらがメジャーですか?
 
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(無題) 削除/引用
No.8633-4 - 2020/02/08 (土) 18:36:06 - #$$%%&’((
リン酸化タンパク質のリプローブは1回目と2回目が同じバンド位置なので、前のが完全に除去できてないと重なってしまうことを知ってるので、2回目のブロットのデータがどうにも自信なくなるので、別々にやってます。

(無題) 削除/引用
No.8633-3 - 2020/02/08 (土) 06:44:27 - おお
>どちらがメジャーですか?

大抵の人は自分の研究室の状況以外はあまり把握してないでしょうから、質問を皆さんはどちらですかに変えたらどうでしょうか?じゃ、そうしましょう。

わたしは昔は2枚用意する方を好みましたが、いまわリプローブしちゃうかな。実験によってはサンプル数がおおくて3枚ぐらいブロッとしなければいけな場合、6枚いるってことになります。ま、そんなデザインはもともと良くないし実験計画で対処すべきだと言われれば、それはそうかも知れません。

不安な点はリプローブするとQuantificationでブレることがありますからね。

(無題) 削除/引用
No.8633-2 - 2020/02/07 (金) 15:01:15 - asan

自分は、リプロービングが完全である保証がないため、初めて使う抗体ならば、リプロービングする前に一度は少なくともレプリカ作って独立で染色することをお勧めします。

ってか、ゲル一枚余分に流すだけなら、その方が早くないか?

WBのリプロービング 削除/引用
No.8633-1 - 2020/02/07 (金) 13:00:54 - おおお
お世話になっております。
学部四年生のものです。

WBでリン酸化、脱リン酸化タンパクを見たいとき、りぷーびんぐをするのと、ゲル二枚で行うのはどちらがメジャーですか?

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