BioTechnicalフォーラム [DAPIの染色ムラについて]

DAPIの染色ムラについて

No.8600-TOPIC - 2020/01/28 (火) 11:44:46 - でんでろ

いつも参考にさせていただいております。

現在、パラフィン切片の免疫染色を行っております。最後にDAPI含有マウント剤を用いて封入・撮像しておりますが、この際に切片の一部分でのみ強くDAPIの発現が見られています。
これまで個人的な経験として、DAPIで染色ムラが見られたことはなかったのですが、このようにDAPIでムラが生じる原因、および解決策について、ご知見あれば教えて頂けませんでしょうか。

マウント剤は、下記試薬を用いています。
ProLong(TM) Gold Antifade Mountant with DAPI(Thermo社 #P36941)
また、脱パラ後のサンプルは乾燥させていないつもりです。

なお、本実験はゼブラフィッシュサンプルを用いており、遅筋（両サイドの一部分）が強く染まっているように見えていますが
ゼブラ以外の動物種でも同様のご経験があればご教示頂きたいです。

宜しくお願い致します。
　

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st様

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No.8600-9 - 2020/01/30 (木) 12:05:28 - でんでろ

>[Re:4] stさんは書きました :
> DAPIを別に染めるのはだめなんですか？
>
> 手間を惜しんでDAPI入りのProLong Goldを試したことがありますが、
>
> 結局別染めに戻しました。

ありがとうございます。
こちら、ProLong Goldでは何か不具合があった（そして別染めで改善した）ということでしょうか。それは染色ムラでしょうか？

重ねての質問で恐縮ですが、ご回答頂けますと幸いです。

くぁうぇsdrgt６７様

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No.8600-8 - 2020/01/30 (木) 12:04:18 - でんでろ

>[Re:3] くぁうぇsdrgt６７さんは書きました :
> 細胞あたりのDNA量に違いがあるのではないですか。

後出しで恐縮ですが、実は、目的のタンパク質（全身に発現すると思われるもの）を染めてみたところ、遅筋のみに染まり、DAPIも同じように染まったため「染色ムラではないか」と考えた次第でした。

DNA量という観点は抜け落ちておりましたので、その点に注意しつつ文献をさらに調べてみます。ありがとうございます。

おお　様

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No.8600-7 - 2020/01/30 (木) 12:01:32 - でんでろ

>[Re:2] おおさんは書きました :
> レンズからの距離が違うためにフォーカスがあってない部分があるとか？

ありがとうございます。
焦点を動かしても改善しないこと確認しておりますし、同一サンプルをHE染色した際にもサンプルの波うちなどは確認されませんでしたので、その点は大丈夫と考えております。

(無題)

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No.8600-4 - 2020/01/30 (木) 10:34:45 - st

DAPIを別に染めるのはだめなんですか？

手間を惜しんでDAPI入りのProLong Goldを試したことがありますが、

結局別染めに戻しました。

(無題)

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No.8600-3 - 2020/01/29 (水) 17:55:53 - くぁうぇsdrgt６７

細胞あたりのDNA量に違いがあるのではないですか。

(無題)

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No.8600-2 - 2020/01/29 (水) 03:25:58 - おお

レンズからの距離が違うためにフォーカスがあってない部分があるとか？