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microRNA過剰発現 トピック削除
No.8590-TOPIC - 2020/01/23 (木) 20:51:26 - にもにも
いつも勉強させて頂いております。

研究で培養細胞にはじめてmicroRNA過剰発現を行います。
どうしてもわからないことがありますので、ご存知の方がいらっしゃったらご教示ください。

プラスミドDNAでmicroRNA過剰発現を行うために、市販ベクターをいろいろと調べました。

蛍光タンパク質で遺伝子導入を確認できるベクターなどが「microRNA発現ベクター」として販売されています。
そもそもmicroRNAは、通常のタンパク質発現ベクター(CMVプロモーター、EF1aプロモーター)では発現できないのでしょうか?

「microRNA発現ベクター」と「通常のタンパク質発現ベクター」を比べてみましても、大差があるように思えません。

研究室の資金のこともあり可能なら「microRNA発現ベクター」を購入せず、手元にある通常のタンパク質発現ベクターで実験を進めるよう、指示を受けました。

ご存知の方がいらっしゃいましたら、
どうぞよろしくお願い申し上げます。
 
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(無題) 解決済み 削除/引用
No.8590-6 - 2020/01/25 (土) 13:33:54 - にもにも
先生方

コメント、ご教示、本当にありがとうございました。

発現ベクターはタンパク質発現もmiRNA発現もともに
CMV-MCS-SV40polyA
という構成になっており、違いが判りませんでした。

AP様、asan様のコメントが大変勉強になりました。
また実例をご教示くださいまして、大変心強くなりました。
早速勉強いたします。


指導教員と実験方針を議論いたします。
本当にありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.8590-5 - 2020/01/24 (金) 11:05:53 - asan
microRNAはpolI系で発現しますよ。普通のmRNAと同じですから。

たとえば こんな感じとか
https://www.nacalai.co.jp/Fount/origene_microrna.html

こんな感じでEGFPのtranscriptと一緒に発現させたりもされてます
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2211124713006876

単にプロセシングによってmiRNAとして機能するだけの話。

pol3系より効率がいい場合もあって最近はshRNAよりもmiRNAベースのKDとかも使われてます。

(無題) 削除/引用
No.8590-4 - 2020/01/24 (金) 02:52:52 - おお

> プラスミドDNAでmicroRNA過剰発現を行うために、市販ベクターをいろいろと調べました。
>
> 蛍光タンパク質で遺伝子導入を確認できるベクターなどが「microRNA発現ベクター」として販売されています。
> そもそもmicroRNAは、通常のタンパク質発現ベクター(CMVプロモーター、EF1aプロモーター)では発現できないのでしょうか?
>

というか本当に調べたのでしょうか、、、
www.takarabio.com/products/gene-function/mammalian-expression-plasmids/microrna-expression

www.origene.com/catalog/vectors/microrna-vector/pcmvmir/pcmvmir-microrna-expression-vector

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0168365910009636?via%3Dihub

またEndoのmiRNAはどのように発現しますか?

(無題) 削除/引用
No.8590-3 - 2020/01/23 (木) 22:16:42 - おお
>「microRNA発現ベクター」と「通常のタンパク質発現ベクター」を比べてみましても、大差があるように思えません。

何をもって?

(無題) 削除/引用
No.8590-2 - 2020/01/23 (木) 22:02:17 - AP
CMV プロモータなどRNA Pol IIで転写するよりも、RNA pol IIIで転写されるプロモータの方が適しているということだと理解しています。pol IIIはpol IIと違って、定まった転写集結配列配列があるので決まった長さの短いRNAを転写させるのに適しています。

microRNA過剰発現 削除/引用
No.8590-1 - 2020/01/23 (木) 20:51:26 - にもにも
いつも勉強させて頂いております。

研究で培養細胞にはじめてmicroRNA過剰発現を行います。
どうしてもわからないことがありますので、ご存知の方がいらっしゃったらご教示ください。

プラスミドDNAでmicroRNA過剰発現を行うために、市販ベクターをいろいろと調べました。

蛍光タンパク質で遺伝子導入を確認できるベクターなどが「microRNA発現ベクター」として販売されています。
そもそもmicroRNAは、通常のタンパク質発現ベクター(CMVプロモーター、EF1aプロモーター)では発現できないのでしょうか?

「microRNA発現ベクター」と「通常のタンパク質発現ベクター」を比べてみましても、大差があるように思えません。

研究室の資金のこともあり可能なら「microRNA発現ベクター」を購入せず、手元にある通常のタンパク質発現ベクターで実験を進めるよう、指示を受けました。

ご存知の方がいらっしゃいましたら、
どうぞよろしくお願い申し上げます。

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