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(無題) 削除/引用 No.8582-9 - 2020/01/23 (木) 19:11:13 - 学生レベル 記載の解釈だけなら個人的には1番だと思います 実際に作るとしたら 使用している担体製品の手順書見て それに合った作り方でいいんじゃないですか たぶんメーカーが品質評価する時に 「pH8のトリス液の製品使いました。pH合わせるの面倒だったからです」 くらいの差でしょうし 似たようなもの使ったことありますが手元のノート見ると それだけの量のimidazole溶かした後のバッファーでは pH9になりました（少なくともPBS数百mLスケール） で、混ぜた後にpH調節しましたが それもメーカーがそう言ってるから、くらいの根拠です さらっと担体製品を検索すると Tris-HCl pH8　,imidazole Tris-HCl ,imidazole,　pH8 製品によって表記がまちまちなので一般的にはどっちでも溶出はできるけど Tris試薬から溶かして自分で用時調製するなら 全て溶かした液のpHを記録しておくかキリ良くpH8なら8と決めて使いますね 心配ならトリスpH8ストックを作っておいて それを使って混ぜた液、それから一部を取り置きしてHClで合わせた液を用意し pH合わせないもの → PH8に合わせたものの順で流してみて 溶出し残りがあるのか確認してみては

(無題) 削除/引用 No.8582-8 - 2020/01/23 (木) 03:58:14 - 直輝 >imidazoleが塩基で比較的量がおおいのでTrisをHClでpH８に合わせた状態でイミダゾールを加えるとpH８を維持できるかは疑問です。 そうなんですよね。 Hisカラムのバッファーを作った時、pH9以上になったような記憶があります。 自分はHClでpH8に戻してました。

(無題) 削除/引用 No.8582-7 - 2020/01/23 (木) 00:25:28 - おお >pHが8からズレてたらNaOHやHClで適宜調整する。 これって場合によっては怪我すると思うのだが。

(無題) 削除/引用 No.8582-6 - 2020/01/22 (水) 22:26:25 - おお http://2017.igem.org/wiki/images/2/2e/T--Oxford--Protocols--purification1.pdf imidazoleが塩基で比較的量がおおいのでTrisをHClでpH８に合わせた状態でイミダゾールを加えるとpH８を維持できるかは疑問です。pH重視なら「２」の方法でやってください。あるいは１MほどのイミダゾールHCl pH８をつくってそれをバッファー調製につかう。 ただ独り言さんのおっしゃるような調製ををしている人は多いと思います。pHというよりはイミダゾールによる効果を期待しているのでそのようなやり方で毎回やるならばそれはそれでありかと思います。

(無題) 削除/引用 No.8582-5 - 2020/01/22 (水) 22:04:15 - buffer乙 一つの例として 1. 1M~500mM Tris-HCl buffer (pH8.0)をストックbufferとしてあらかじめ作って保管しておく。 2. 使用量を想定した上でこれを水で希釈して50mM Tris-HClを作る。 3. これにNaClとImudazoleを所定の濃度になるように加えて溶かす。 4. pHをチェックする。NaClとImidazoleを入れたことでpHが8からズレてたらNaOHやHClで適宜調整する。（ほとんどずれていない感じなら、以降はpHはチェックしなくてもいい。） てか、どのように作ろうと自由で、要は、必要なものが所定の濃度になるように入っていて、かつできたものが最終的にpH8.0になってれば（なってないなければなるように合わせれば）それでいい。

(無題) 削除/引用 No.8582-4 - 2020/01/22 (水) 18:03:27 - 独り言 どちらも間違いではないけど、一般的ではありません。 まず 1M Tri-HCL pH8 5M NaCl 1M Imidazole の３つのストック溶液を、別々に作成します。 というかラボにありませんか？ それらと水をまぜて、終濃度がそのelution bufferになるように希釈して作ります。 なので、正解は1M Tris-HCLを作成するときにpHをに調節します。

(無題) 削除/引用 No.8582-3 - 2020/01/22 (水) 17:55:30 - asan ぶっちゃけ、1も2も基本的には”ほぼ”同じになると思うけど。 でも50mM に加えるのではなくて、 通常は 1M とかを希釈して使ってね。 ”最終濃度”だから。 そもそもバッファーなんだから、そういう目的で使ってるわけでpHが簡単に変わったら意味がないよね。

(無題) 削除/引用 No.8582-2 - 2020/01/22 (水) 13:35:32 - AA Tris-HCl、というのは"塩酸でpH調整したTrisバッファー"という意味だと思いますが。

BufferのpH調整手順について 削除/引用 No.8582-1 - 2020/01/22 (水) 13:16:14 - yu タンパク質精製用のBufferを調製する際のpHの調整について質問させていただきます。 [Elution buffer: 50 mM Tris-HCl pH8, 500 mM NaCl, 400 mM imidazole] このように記載されている場合、 1. 50 mM Tris-HCl溶液をpH8に合わせて、そこへNaClとimidazoleを加える。 2. Tris,NaCl,imidazoleを加えた後にHClでpH8に合わせる。 この２つのうち、どちらが正しい解釈でしょうか。

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