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(無題) 削除/引用 No.8496-6 - 2019/12/17 (火) 19:19:40 - 初心者マーク >[Re:2] asanさん 購入した方が間違いないですよね。Packaging　plasmidをどうにか活用できないかと考えてしまって・・・ >[Re:3] 友さん >[Re:5] みさん グラム換算で考えてしまっていました！もう少し比率を検討してみたいと思います。 >[Re:4] おおさん もう一度、分離、精製してみて検討しなおしてみます！ 質問に答えていただき、ありがとうございました。 何度もうまくいかなくて、行き詰まってしまっていました。 また何かありましたら、ご相談させてください。

(無題) 削除/引用 No.8496-5 - 2019/12/16 (月) 22:33:00 - み >[Re:3] 友さんは書きました : > 比率の問題かも だよね。 ﾌﾟﾗｽﾐﾄｻｲｽﾞが大きなものはｸﾞﾗﾑ換算で考えているとモル数が少なくなるし、さらに導入効率も低い。

(無題) 削除/引用 No.8496-4 - 2019/12/16 (月) 22:18:58 - おお ＞分離ができないようにしている商品 そのようなものがあるとは聞いていません。

(無題) 削除/引用 No.8496-3 - 2019/12/15 (日) 00:03:29 - 友 比率の問題かも

(無題) 削除/引用 No.8496-2 - 2019/12/14 (土) 20:51:35 - asan 普通にできると思うけど、ベクターなんてaddgeneで買えばそんなに高くはないし、普通に仲のいい近くのラボに頼めばそれこそ分けてくれるレベルのものだと思うので、あえて複雑なことして不安になるなら正攻法で入手したほうが早いというのもあると思います。

Packaging plasmidの分離について。 削除/引用 No.8496-1 - 2019/12/14 (土) 19:16:13 - 初心者マーク 　いつも勉強させていただいています。初めて質問させていただきます。 レンチウイルスの実験を行っています。3種類のplasmidが入ったPackaging plasmidと空のvectorでレンチウィルスを作製しています。 Packaging plasmidは高価ですので、plasmidを単離させ増やして使用しようと思ったのですが、分離したplasmidとLipofectionしてもウイルスができません。 分離方法としては、conpetent cellにPackaging plasmidを導入してprepにて回収し電気泳動後、ゲルを切り出して単離したplasmidを回収。その他に、copetent cellに導入後、プレーティングしてコロニーを20箇所ほど回収し培養してprep後、PCRにかけてそれぞれのplasmidを確認して使用してみました。 　もしかしたら、こうした分離ができないようにしている商品なのかもしれませんが、こちらの書き込みを見ていたら分離できてウイルスを作製できた方もいらっしゃったようなので、何かしらアドバイスをいただければと思い書き込んでみました。 宜しくお願い致します。

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