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(無題) 削除/引用 No.8478-12 - 2019/12/10 (火) 08:35:01 - TS >現在、wellの左壁面に向かって伝わせるように培地を加えているので、 もしかしたらそのせいで左側だけ剥げてしまうのかもしれません。 これ、接着の弱い細胞だと学生によって時々起きますよ。 雰囲気的には、これが原因の気がします。 癖でだいたい同じところから培地を流し込むので。 Seedingの翌日に培地交換するのも考え直してみては。 ラボの流儀もあるのでしょうけど。

(無題) 削除/引用 No.8478-11 - 2019/12/09 (月) 22:11:12 - ぷりん ちき 様 ご回答ありがとうございます。 表面張力により、medium量が少ないと細胞が偏りやすいと聞いたことがあったので、今回はmedium量を増やしてみたのですが、そのようなご意見もあるのですね。 次回は、medium量を減らしてもう一度行ってみたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.8478-10 - 2019/12/09 (月) 22:00:39 - ぷりん asan　様 ご回答ありがとうございます。 おっしゃる通り、もう少し注意してこまめに細胞を観察して、 どの時点で偏ってしまっているのか確認したいと思います。

(無題) 削除/引用 No.8478-9 - 2019/12/09 (月) 21:56:21 - ぷりん クァwせdrftじこl　様 ご回答ありがとうございます。 以前、フラスコなどとは異なって、24well plateに播種する際は 振とうすると逆に偏ってしまうという情報を見たことがあったので、 今回の培養では振とうしないようにしていました。 次は播種直後に振とうして偏らないかどうか確認してみたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.8478-8 - 2019/12/09 (月) 21:50:01 - ぷりん TS 様 ご回答ありがとうございます。 培地交換前に顕微鏡で確認していますが、 その際は問題なく接着しているように思います。 それでも、後に確認すると右下にしか細胞が接着していないので、 培地交換の際に細胞がダメージを受けてしまっている、または剥がれてしまっている可能性はあると思います。 現在、wellの左壁面に向かって伝わせるように培地を加えているので、 もしかしたらそのせいで左側だけ剥げてしまうのかもしれません。 やり方を少し変えて、行ってみたいと考えています。

(無題) 削除/引用 No.8478-7 - 2019/12/09 (月) 19:23:33 - ちき medium量が少ないほうがいいというdiscussionがありました。 https://www.researchgate.net/post/How_to_ensure_even_distribution_of_adherent_cells_in_6-well_plates 現実的かどうかはともかく、自分でdeviceを作った人もいます。 https://doi.org/10.1371/journal.pone.0207211

(無題) 削除/引用 No.8478-6 - 2019/12/09 (月) 18:53:17 - asan 細胞を撒いて10ぷん後ぐらいとか1-2時間後に確認した時にどうなってるのか、置いてる間に偏るのか、wellに液を入れる時にムラができてないか、その辺を注意してやってみるしかないでしょう。

(無題) 削除/引用 No.8478-5 - 2019/12/09 (月) 18:15:44 - クァwせdrftじこl 播種後にインキュベタにしまう前に縦方向横方向に数回丁寧に振ると思いますが、ちゃんと振ってますか。変な方向に振ってませんか。細胞の接着が遅い傾向はありませんか。

(無題) 削除/引用 No.8478-4 - 2019/12/09 (月) 16:52:30 - ぷりん 摩訶々々 様 ご回答ありがとうございます。 内部の棚の傾きを測定しましたが、傾いてはいないようでした。 24well plateでしか培養したことがないので、他のplateではどうなるか分からないのが現状です。 ただ、フラスコで培養しているときに同様の現象が起きているとは感じたことがありません。 現在、細胞を24well plateに播種した翌日に培地交換をしているのですが、 細胞が接着しきれていない状態で培地交換を行ってしまっていて、 水圧で細胞が剥がれてしまう可能性があるのではないか、と考えていますが... こういうことは考えられるのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.8478-3 - 2019/12/09 (月) 16:41:05 - TS 確認ですが、接着のばらつきの問題なのですよね。 播種してから培地交換する前の観察ではどうですか。 つまり培地交換とかではがれてないかという点です。 アスピレーター云々の記述があるので、なんどか培地交換をしていれば、 培地交換の時に細胞がはがれている可能性はないですか。

(無題) 削除/引用 No.8478-2 - 2019/12/09 (月) 16:27:19 - 摩訶々々 やはりインキュベーターの傾きが一番怪しいと思いますが、 内部棚の傾きも無いということなのですよね？ 不思議です。 ２４ウェルだけの現象でしょうか？ １２ウェルとか４８ウェルでは起こらない？

細胞培養　24well plate 削除/引用 No.8478-1 - 2019/12/09 (月) 13:36:19 - ぷりん 現在STC-1細胞を24wellプレートで培養しているのですが、well全体に接着がなされず、毎回wellの右下に偏る現象が多発しております。以下の点についてトラブルシューティングをしたのですが、現状改善が見られません。この問題を解決するにあたり、皆様のお力をお貸しいただけませんでしょうか。 トラブルシューティング 1）24well plateの不良を検討し、violamoからthermoに変えた 2）細胞播種後、振動しないようにインキュベーター内でプレートを静置した 3）インキュベータの傾きを測定したが、傾きはなかった 4）細胞播種時のmedium量を500 μLから1 mLにした 5）培地交換の際にアスピレーターで吸引からピペットマンで吸引に変更した

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