Bio Technical フォーラム

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凍結組織のタンパク抽出 トピック削除
No.8467-TOPIC - 2019/12/04 (水) 08:05:00 - やすみじかん
リパバッファーを使って、
凍結されたマウスの肺からタンパク抽出しようと思います。
肺を常温に戻してから粉砕するのか、
凍結されたまま粉砕するのかどちらがいいのでしょうか。
 
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(無題) 削除/引用
No.8467-4 - 2019/12/04 (水) 21:25:49 - やすみじかん
おおさん、クァwzせxdcrvtびゅにmこ、lpさん、
ご回答ありがとうございます。
頑張ってみます。

q3話4重5s6rd7tf8y9 削除/引用
No.8467-3 - 2019/12/04 (水) 14:09:48 - クァwzせxdcrvtびゅにmこ、lp
小さいジップロックの袋に入れて板状のドライアイスにおいてハンマーで叩いてある程度の小片にしてから冷たいlysis bufferを適量(組織量:液量が1:10~1:20くらいが良い)満たしたホモジナイザーに投入してすぐにホモジナイズしてます。RIPA bufferはマイルドなので、proteinaseやphosphataseが働いてしまうのでInhibitor添加と低温維持は重要です。RIPA buuferでは、見たいものが十分可溶化できず不溶画分に行ってることもあります。遠心後の沈殿も捨てずに-80Cで保存しておきましょう。

(無題) 削除/引用
No.8467-2 - 2019/12/04 (水) 08:48:33 - おお
凍結した組織に4度に冷やしたバッファーを加えて温度を上げないように注意しながら破砕してください。

凍結組織のタンパク抽出 削除/引用
No.8467-1 - 2019/12/04 (水) 08:05:00 - やすみじかん
リパバッファーを使って、
凍結されたマウスの肺からタンパク抽出しようと思います。
肺を常温に戻してから粉砕するのか、
凍結されたまま粉砕するのかどちらがいいのでしょうか。

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