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ウエスタンによるリン酸化AKTの検出
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No.8457-TOPIC - 2019/11/29 (金) 15:02:44 - ウェ
こんにちは。
現在、薬剤の感受性をリン酸化AKTの検出により評価しています。
以前、血清ありで24h培養した細胞だとコントロールと薬剤処理での差が見られなかったため、血清ありで12h,なしで12h培養した細胞でウエスタンを行ったところ、AKTのリン酸化に差が見られました。
先日、急な用事が入り、血清ありで培養する時間を6hに減らしたサンプルを使用したところ、コントロールでもAKTのリン酸化が強く検出されました。
血清が無けりゃ良いっていうものでもないのでしょうか?
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No.8457-8 - 2019/12/07 (土) 11:28:55 - ウェ
遅くなりすみません。
みなさまありがとうございます。
おお様
リン酸化AKT 上昇に伴い、トータルも上がってしまっています。
論文だと12時間血清あり、その後、12時間血清なしでの培養をやっているものがあったので、その条件でやってみたいと思います。
生理的に安定してないから再現がとれないのですね。
(無題)
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No.8457-7 - 2019/12/03 (火) 22:11:15 - 5
細胞集団としての細胞周期とかが絡んでると思う。
(無題)
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No.8457-6 - 2019/12/03 (火) 05:33:15 - おお
あと差がありと言いますけど、バックグランドの(薬剤なし)リン酸化のレベルはそれぞれどのように違いますか?
(無題)
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No.8457-5 - 2019/12/03 (火) 05:24:53 - おお
6h 血清ありというのは細胞をまいてから6時間ですか?それなら細胞がまだ生理的に安定してないと思います。
(無題)
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No.8457-4 - 2019/12/01 (日) 23:02:24 - ウェ
わかりにくかったです。
すみません。
AKTのリン酸化に差が見られた条件は、
12h 血清ありで培養ののち、12h血清なしの培地にメディウムチェンジし、その後、薬剤を3h処理した場合です。
差が見られなかった条件は、6h血清あり、12h血清なしの培地にメディウムチェンジした場合です。
薬剤処理時間は同じです。
顕微鏡で見たところ、細胞の増殖には特に差がないように見えました。
wzsぇdcfrvtyぶい
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No.8457-3 - 2019/11/30 (土) 19:04:33 - クァswでfrgtひゅじこs
情報が不足しているので、以下の事項を教えてください。
1.それぞれの実験で 薬剤はどの時点で入れたのですか。
2. 細胞を播種して血清培地で12or 6時間培養したのち無血清にしたということですか。使用した細胞の
増殖状態は2回の実験では同様ですか。
3. 血清の有無が細胞に与える影響は広範かつ複雑で、そのテーマだけでも総説論文が出ているくらいですので、その辺りのことも意識して十分準備された方が良いかもしれないと思います。
(無題)
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No.8457-2 - 2019/11/29 (金) 17:06:19 - とも
なんか書いてることよくわからんけど、とにかく同じ条件でやるべき
ウエスタンによるリン酸化AKTの検出
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No.8457-1 - 2019/11/29 (金) 15:02:44 - ウェ
こんにちは。
現在、薬剤の感受性をリン酸化AKTの検出により評価しています。
以前、血清ありで24h培養した細胞だとコントロールと薬剤処理での差が見られなかったため、血清ありで12h,なしで12h培養した細胞でウエスタンを行ったところ、AKTのリン酸化に差が見られました。
先日、急な用事が入り、血清ありで培養する時間を6hに減らしたサンプルを使用したところ、コントロールでもAKTのリン酸化が強く検出されました。
血清が無けりゃ良いっていうものでもないのでしょうか?
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