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(無題) 削除/引用 No.8450-6 - 2019/11/27 (水) 23:45:29 - 乙 糸状菌、研究でググると国内でもいくつか研究室がヒットするので、そういうとこに、メールで聞くのが普通に一番確実と思った。わかんないときはいつもそうやってる。 てか、ああゆうのって見かけほどにはもともとタンパク質そんなに多くないと思うので、それなりの量を使わないといけないかもしれない。

(無題) 削除/引用 No.8450-5 - 2019/11/27 (水) 21:55:46 - のん ぐひさん ご回答ありがとうございます。 ご指摘頂いたようにグルカナーゼやヤタラーゼなどで細胞壁わとかすというのも考えようと思います。 乳鉢である程度小さくすり潰してから、今使っているSKミルで破砕、というのも手法としてありでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.8450-4 - 2019/11/27 (水) 17:14:31 - dxctfyぐひ 1. チップ型超音波破砕装置で冷却しながらビッーを3~6回行う。発熱するので冷やしながらする。 2. 酵素的な方法も検討できるかもしれない。

(無題) 削除/引用 No.8450-3 - 2019/11/27 (水) 13:50:01 - のん もんさん やはりそうですよね…。 今は凍結ミルを用いているんですが、なかなかうまくいかず、別の手法をと考えた結果でした。 細胞壁を壊すための、教えていただいた手法を検討してみようと思います。 ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.8450-2 - 2019/11/27 (水) 13:29:41 - もん 乳鉢乳棒は厳しいかもです。。 ビーズショッカーまたはyatalase(Takara)→浸透圧ショックなどで硬い細胞壁を壊さないとですね．

培養後の糸状菌菌体からのタンパク質の抽出 削除/引用 No.8450-1 - 2019/11/27 (水) 13:06:48 - のん 宜しくお願いします。 培養後の糸状菌菌体からタンパク質を抽出し、酵素活性を行いたいと思っています。 菌体破砕後、リン酸Bufを加えて振盪し、遠心分離による上清を粗酵素溶液として採取するのですが、マイクロプレートリーダーで測定したところタンパク質量が非常に少なく、酵素活性の測定には不十分でした。 そこで、乳鉢と乳棒を使用して破砕をしようと思っているのですか、乳鉢に菌体を入れた後に液体窒素を加え、融解しそうになったら液体窒素をまた加えてひたすらすりつぶす、というやり方で良いのでしょうか？ 破砕ができないという簡単な質問で申し訳ないのですが、困っているので宜しくお願いします。

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