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BSAコーティングプロトコール トピック削除
No.8397-TOPIC - 2019/11/12 (火) 18:16:00 - K
細胞接着に関する実験で、ネガティブコントロールとしてBSAコーティングしたdishを作成しています。

論文等を参考に、以下のプロトコールで行っているのですが細胞の接着が確認されてしまいます。

どなたかプロトコール等を持っている方がいらっしゃいましたらご教授お願い致します。

1. PBS-MQにBSA粉末を溶かし、1% BSAになるように調製する。
2. 35 mm dishに調整したBSA溶液を2.0 ml加える。
3. 溶液がplateの底をまんべんなくコートするように揺らす。
4. plateのふたを閉め、1-2時間インキュベーター内で静置する。
5. 静置後、1% BSA溶液を捨て、細胞を播種する。
 
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No.8397-7 - 2019/11/13 (水) 04:04:35 - おお
>論文等でみられるネガティブコントロールとしてのBSAコーティングは接着培養用ディッシュを使用していないということでよろしいでしょうか?

あなたの実験の目的は何でしょうか?それによって適切なコントロールは違ってきます。参照した論文はなんですか?細胞はなんですか?

(無題) 削除/引用
No.8397-6 - 2019/11/12 (火) 23:33:04 - み
何の細胞か書くべきでしょう。
そもそも接着させるための表面処理したdishを使用していたら接着するのはあたりまえ。
せめてnon tissue culture treatedや低接着のものを使ってみるとか、ペトリディッシュやソフトアガーを工夫するとか。

(無題) 削除/引用
No.8397-5 - 2019/11/12 (火) 23:11:40 - bんjk
ものの順序として、FCS含有培地が付着系細胞培養に汎用される世の中にあって、BSAが細胞接着を阻害するという報告があるのかどうかまず調べてみたらどうか、と思いました。

(無題) 削除/引用
No.8397-4 - 2019/11/12 (火) 18:57:47 - K
おお様、moz様ご意見ありがとうございます。

論文等でみられるネガティブコントロールとしてのBSAコーティングは接着培養用ディッシュを使用していないということでよろしいでしょうか?

また、接着培養用ディッシュでネガティブコントロールとするには何がよろしいのでしょうか。

非常に無知で申し訳ないのですが、ご教授お願い致します。

(無題) 削除/引用
No.8397-3 - 2019/11/12 (火) 18:38:23 - moz
FBS添加培地でコートしているのとほぼ同じでは?
通常の接着培養用?ディッシュを使っていればまず無理でしょう。
浮遊培養用ディッシュでも完全に接着させないようにするのは難しく、各種特殊表面処理ディッシュが市販されているくらいですよ。

(無題) 削除/引用
No.8397-2 - 2019/11/12 (火) 18:26:26 - おお
むしろ接着してもおかしくないと思えるのはわたしだけでしょうか。

BSAコーティングプロトコール 削除/引用
No.8397-1 - 2019/11/12 (火) 18:16:00 - K
細胞接着に関する実験で、ネガティブコントロールとしてBSAコーティングしたdishを作成しています。

論文等を参考に、以下のプロトコールで行っているのですが細胞の接着が確認されてしまいます。

どなたかプロトコール等を持っている方がいらっしゃいましたらご教授お願い致します。

1. PBS-MQにBSA粉末を溶かし、1% BSAになるように調製する。
2. 35 mm dishに調整したBSA溶液を2.0 ml加える。
3. 溶液がplateの底をまんべんなくコートするように揺らす。
4. plateのふたを閉め、1-2時間インキュベーター内で静置する。
5. 静置後、1% BSA溶液を捨て、細胞を播種する。

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