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Hela細胞 回復方法 トピック削除
No.8378-TOPIC - 2019/11/07 (木) 11:26:29 - Tiyura
学部4年で、Hela細胞(Hela S3(SC))(接着細胞)の培養を始めたばかりの者で私の研究室では今まで植物細胞のみを取り扱ってきたため、周りに質問できる方がいないので、こちらで質問させて頂きました。

Hela細胞を培養し始めて、1週間は上手く培養できていました。
3回目の植え継ぎを終えて2日後、細胞が接着せず、全て浮いていました。
これは、死んでしまったということなのでしょうか。また、正常な細胞に戻す(回復させる)方法はありますでしょうか。

初歩的な内容で申し訳ないのですが、ご教示いただけると幸いです。

※培地:MEM培地+10% Cf、抗生物質無し、培養用フラスコ(25 mL)
 
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(無題) 削除/引用
No.8378-4 - 2019/11/09 (土) 01:54:11 - t
培地とハンクス液を間違えてそうなったことあります。いやほんとのところはわかりませんが、多分だろうなと思ってます。色といい瓶といいよく似てたもので。

(無題) 削除/引用
No.8378-3 - 2019/11/07 (木) 12:53:56 - 独り言
HeLaが浮いているのは、死んでいるということです。

>※培地:MEM培地+10% Cf、抗生物質無し、培養用フラスコ(25 mL)


この10% Cfというのは牛血清だと思うのですが、これは研究室で培養細胞に使用した実績のあるものですか?
それとも新たに購入したものですか?

あと、浮いているHeLaと一緒にモワモワするような小さい生物が混じってませんか?コンタミ?



ちなみに数日間浮いた状態になってしまったHeLaを回復する方法はないと思います。
ただしもし少しでも張り付いているHeLaがあるのであれば、1週間ぐらい培養して増殖するのを期待することはできます。

(無題) 削除/引用
No.8378-2 - 2019/11/07 (木) 12:29:51 - おお
原因はピンからキリまで挙げられそうで実際に現場にいないとそのうちのどれがもっともらしいかいえそうにもないですが、、、

培地にグルタミンが入っていなかった(この場合は大抵はけいだいする前にへたってしまいそうですが)

血清があってない。あるいは非動化が必要なものを使っている。

マイコプラズマなどのコンタミ。

けいだい(Trypsin 処理など)不手際

接着細胞培養用Dishとそうでないもののとり間違え。

Hela細胞 回復方法 削除/引用
No.8378-1 - 2019/11/07 (木) 11:26:29 - Tiyura
学部4年で、Hela細胞(Hela S3(SC))(接着細胞)の培養を始めたばかりの者で私の研究室では今まで植物細胞のみを取り扱ってきたため、周りに質問できる方がいないので、こちらで質問させて頂きました。

Hela細胞を培養し始めて、1週間は上手く培養できていました。
3回目の植え継ぎを終えて2日後、細胞が接着せず、全て浮いていました。
これは、死んでしまったということなのでしょうか。また、正常な細胞に戻す(回復させる)方法はありますでしょうか。

初歩的な内容で申し訳ないのですが、ご教示いただけると幸いです。

※培地:MEM培地+10% Cf、抗生物質無し、培養用フラスコ(25 mL)

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