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DNAの3'UTR配列の見つけ方に関して トピック削除
No.8348-TOPIC - 2019/10/23 (水) 21:00:11 - ぽよん
細胞株にあるmiRNAとある遺伝子の3'UTRを合成したオリゴDNAを組み込んだルシフェラーゼベクターを導入しレポーターアッセイを行いたいと考えております。3'UTRの合成を業者に受託しようと考えております。
・3'UTRの配列は既出文献から探して見つけるものでしょうか?
・他に探し方などありますでしょうか?
初心者で間違えがありましたら失礼します。
よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.8348-3 - 2019/10/24 (木) 14:06:56 - AP
1) 実験的データ(cDNA配列、transcriptiome)があれば、NCBIほかデータベースで見つかるでしょう。モデル生物ならgenome viewerなんかに転写産物(各種バリアントを含め)もマップされているのがあるはず。
念の為言うと、3' UTRに用があるからと言って3' UTR配列を探しに行くんじゃなくて、あくまでも転写産物、cDNAの配列情報を取りに行くのです。そこから3' UTRと抜き出すのは何の手間でもない。

2)既存のデータがなくても実験的に自前で調べることは容易。3' RACEでもすればよろしい。

(無題) 削除/引用
No.8348-2 - 2019/10/24 (木) 02:08:53 - おお
データーベース

www.ncbi.nlm.nih.gov/gene
ここで検索するとその遺伝子の情報が得られるので、そこからRefSeq#などを拾い上げる。
www.uniprot.org/
蛋白のデーターベースだが、mRNAの情報ものっている。
useast.ensembl.org/index.html
ここで遺伝子を検索するしTranscriptsの情報をみる。

場合によっては抗体のカタログや業者のカタログのshRNA発現ベクター検索結果などからRefSeq #がわかることもある。cDNA売っているところもそうだと思うOrigeneとかかな。

Googleで遺伝子名と多分Geneというワードを入れて検索するとWikiのその遺伝子の解説が引っかかることがあるので、そこからRefSeq#などが手に入る。

文献検索はやっておくこと。たまにSplicing IsoformやPolyAサイトの違いが発現パターンに影響することがあるし、実際にクローニングされた論文でそのバリエーションに関して情報があるかもしれないから。

DNAの3'UTR配列の見つけ方に関して 削除/引用
No.8348-1 - 2019/10/23 (水) 21:00:11 - ぽよん
細胞株にあるmiRNAとある遺伝子の3'UTRを合成したオリゴDNAを組み込んだルシフェラーゼベクターを導入しレポーターアッセイを行いたいと考えております。3'UTRの合成を業者に受託しようと考えております。
・3'UTRの配列は既出文献から探して見つけるものでしょうか?
・他に探し方などありますでしょうか?
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よろしくお願いします。

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